通过研究乙醇提取重阳木叶中黄酮的工艺条件，在单因素试验的基础上，对影响重阳木叶黄酮提取量的黄酮提取时的温度，超声提取时的频率，乙醇提取时的浓度和液料比等因素进行初步探讨。采用响应曲面法，从而探索出重阳木叶中的黄酮用乙醇提取时的最佳工艺条件[10-12]，目的是为了重阳木叶中黄酮的进一步开发以及利用提供技术支持。

1 材料与方法

1。1 材料与试剂

重阳木叶于2014年9月在江苏师范大学生命科学学院附近采摘，至于通风干燥的实验室内晒干，用粉粹机将重阳木叶粉粹装袋保存。 

无水乙醇、蒸馏水、芦丁标准品、FeSO4、H2O2、水杨酸、邻苯三酚、Tris、HCl。

1。2 仪器与设备

上海舜宇恒平科学仪器有限公司生产的UV2800紫外可见分光光度计；上海精宏实验设备有限公司生产的DK-SI4电热恒温水浴锅 ；上海恒平科学仪器有限公司生产的干燥箱和MP2002电子天平；赛多利斯科学仪器（北京）有限公司生产的电子天平；上海安亭科学仪器厂生产的TDL-40B台式离心机 ；上海豫康教仪器设备有限公司生产的循环水式多用真空泵SHB-IIIA ；上海申生科技有限公司生产的旋转蒸发器；粉碎机；昆山市超声仪器有限公司生产的KQ-250DE型医用数控超声波清洗器。

1。3 方法 

1。3。1 确定最大吸收波长

  分别取芦丁标准品及总黄酮提取液在200-400 nm进行紫外扫描，结果见图1-1和图1-2。由图1-1可看出，芦丁在240-280 nm和340-380 nm处有吸收峰，而在图2中可看出在240-280 nm处吸收峰较杂乱，因此选取340-380 nm中的最大吸收波长346 nm用于测量。文献综述

 芦丁紫外吸收光谱图

Fig。1-1 The picture of ultraviolet absorbanc of rutin

      图1-2 重阳木叶总黄酮提取液紫外吸收光谱图

     Fig。1-2 The picture of ultraviolet absorbance oftotal  flavonoids from the leaves of Bischofia polycarpa

1。3。2制备芦丁标准曲线

参考文献[13]的方法，称取5mg的芦丁标准品，溶解于30%的乙醇中，定容于50 mL的容量瓶中制0。1 mg·mL-1的芦丁溶液，分别取1。0，2。0，3。0，4。0，5。0 mL到5个10 mL的容量瓶中，用30%乙醇定容。以30%的乙醇为空白对照，在波长346 nm处分别测其不同浓度的吸光度，以其吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制芦丁标准曲线（图1-3），线性回归方程为A=21。909×C，相关系数R²=0。92053。

芦丁标准曲线

Fig。1-3 The standard curve of rutin

1。3。3 HPLC-MS法测定重阳木叶总黄酮提取液的主要成分结构

参考文献[14]，用HPLC对重阳木叶总黄酮提取液进行分析，得出提取液中主要物种种类。流动相由溶液A（0。1 %甲酸溶于水）和溶液B（0。1 %的甲酸溶于氰化甲烷）组成。在柱温为25℃时，以1。0毫升/分钟进行梯度洗脱，在40分钟内由10 %线性增加到26 %B，在70分钟达到65 %，在100分钟达到100 %B并保持到105分钟。最后一步，在70分钟时65 %B增加到在100分钟时100 %B。

1。3。4单因素试验及黄酮含量测定

单因素试验分别对超声频率、超声时间、乙醇体积分数和料液比进行试验。分别选取超声频率50、60、70、80、90 Hz，超声时间30、40、50、60、70 min，乙醇体积分数10、20、30、40、50%，料液比1:30、1:40、1:50、1:60、1:70进行单因素试验。

黄酮含量测定选用紫外分光光度法，以提取溶剂进行调零，分别测定总黄酮提取液的吸光度，对总黄酮提取量进行计算。

1。3。5响应面法优化提取条件

综合单因素试验结果，应用响应面法优化重阳木叶中总黄酮的提取工艺条件，在2因素2水平上进行对重阳木叶总黄酮的提取工艺的优化。