Keyword: Germacrene A synthase; β-Elemene; Rite-Directed Mutagenesis; GC-MS
目录
1。引言 5
1。1莴苣及吉马烯A合酶的简介 5
1。2榄香烯的简介 6
1。3β-榄香烯的生物合成途径 6
1。4倍半萜合酶的定点突变研究 7
1。5定点突变技术 8
1。6本研究目的及其意义 8
1。7本研究的技术路线 9
2。实验部分 9
2。1 实验材料及试剂 10
2。1。1 植物材料 10
2。1。2 菌株和质粒 10
2。1。3 仪器设备 11
2。1。4试剂及试剂盒 12
2。2 实验操作方法及步骤 13
2。2。1 提取BL21-PET-28a-Lsgas质粒DNA 13
2。2。2 PCR扩增突变质粒PET-28a-Lsgas 13
2。2。3 去掉模板质粒DNA 14
2。2。4 转化Trans5α感受态细胞源Y于U优I尔O论P文W网wwW.yOueRw.com 原文+QQ75201-8766 ,筛选阳性克隆子做菌落PCR扩增 15
2。2。5 突变质粒DNA提取 15
2。2。6 转化BL21感受态细胞,筛选阳性克隆子做菌落PCR扩增 16
2。2。7 突变质粒的大肠杆菌表达及蛋白SDS-PAGE分析 16
2。2。8 气相检测突变产物 17
3。结果与讨论 17
3。1提取BL21--Lsgas质粒的验证 17
3。2突变质粒PET28a-Lsgas-T412S的构建 18
3。2。1 PCR扩增突变质粒PET-28a-Lsgas的验证 18
3。2。2 Lsgas-T412S转化Trans5α感受态细胞 19
3。2。3 突变后质粒Lsgas-T412S的验证 19
3。2。4 LSGAS-T412S突变质粒转化BL21感受态细胞 20
3。3突变质粒PET28a-Lsgas-DE的构建 21
3。3。1 LSGAS-DE突变质粒转化BL21感受态细胞 21
3。4突变质粒PET28a-Lsgas-Y530F的构建 21
3。4。1 LSGAS-DE突变质粒转化BL21感受态细胞 22
3。5突变后的吉马烯A合酶SDS-PAGE分析 22
3。6气相检测结果 23
4总结与展望 25
参考文献 26
致谢 27
1。引言
1。1莴苣及吉马烯A合酶的简介来自优Q尔W论E文R网wWw.YouERw.com 加QQ75201.8766
莴苣(Lactuca sativa)又名生菜、莴笋、千金菜,为菊科莴苣属,一年或二年生草本植物。[ ]。莴苣属植物所含化学成分比较丰富。主要包括萜类、甾醇、黄酮及苷类等等[2]。莴苣属的生理活性成分主要集中在倍半萜类化合物上 [ ]。因此,这部分也一直是研究的热点和重点。 莴苣吉马烯A合酶突变体的构建及催化性质分析(2):http://www.youerw.com/yixue/lunwen_184311.html