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新型可注射水凝胶软骨再生支架的制备(5)

时间:2021-06-08 20:06来源:毕业论文
2.2 琥珀酰壳聚糖(SCS)的合成 0.5g壳聚糖溶解在40ml 5%(v/v)乳酸溶液,然后加入160ml甲醇溶液来稀释溶液。1.5g丁二酸酐被添加到该溶液,在室温搅拌。2

2.2 琥珀酰壳聚糖(SCS)的合成

    0.5g壳聚糖溶解在40ml 5%(v/v)乳酸溶液,然后加入160ml甲醇溶液来稀释溶液。1.5g丁二酸酐被添加到该溶液,在室温搅拌。24小时后,通过调节溶液pH 6~ 7使沉淀琥珀酰壳聚糖改性。滤出沉淀物,再溶解于水,经过3天透析。纯化后的产物进行冻干保存于4oC。由茚三酮法确定SCS取代度为38%。

2.3 甲基丙烯酸酯化壳聚糖的合成

    基丙烯酸(MA)接枝到SCS上。0.5g SCS溶解在150毫升纯净水中,配置成溶液。接枝MA在SCS,50ml 纯净H2O中加入8005 µL MA(9.4mol)和400mg EDC在4oC中培养48h。在搅拌下把MA/EDC溶液加入到SCS溶液。混合物在室温透析12h(截留分子量为10,000)后冻干(- 50 oC)。

2.4 聚乙二醇二甲基丙烯酸酯的合成

    在24h,4oC条件下,通过使甲基丙烯酰氯对PEG三乙胺存在下在二氯甲烷经乙醚沉淀,首先合成了PEG二甲基丙烯酸酯大分子单体。聚乙二醇二甲基丙烯酸酯溶解,在二氯甲烷、乙醚下沉淀三次,以去除杂质。本研究中,在PEG大分子单体中甲基丙烯酸酯的接枝率达到95%,纯度>99%。来!自~优尔论-文|网www.youerw.com

2.5 SCS/ PEG水凝胶的制备

    在紫外线下照射1h,以达到对甲基丙烯酸酯化的SCS消毒。然后溶于无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS,pH= 7.4)获得10mg/ml溶液。聚乙二醇二甲基丙烯酸酯大分子单体溶解在PBS中最终浓度为10%(W / W)。聚乙二醇二甲基丙烯酸酯溶液的消毒过滤通过一个0.2µM注射器过滤器。在制备凝胶中,将SCS溶液或无聚乙二醇二甲基丙烯酸酯溶液注入1.5ml离心管。SCS:PEG的重量比分别为100:0、90:10、70:30。紫外线光引发剂,Irgacure 2959,增加了重量的最终浓度为0.05%。在37oC孵育30分钟后,含光引发剂的大分子单体在一个功率~10mW/cm2,365nm的紫外线光下照射15分钟。所形成的水凝胶被分别指定为SCS、SCS/PEG-10和SCS/PEG-30。

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