多糖合成途径中功能基因的鉴定及其在粘细菌发育中的研究(5)
时间:2018-07-10 10:37 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
4613exR TCCAGGAGCTGCTGGGTGCCC Reverse primer for testing the expression of MXAN_4613 5333exF ACCGCGAAGTCCTGCGGTTGC Forward primer for testing the expression of MXAN_5333 5333exR CCGCCCCACGCCCACGAAGTCC Reverse primer for testing the expression of MXAN_5333 6908exF CTTCGCGAAGAACGTGCATGA Forward primer for testing the expression of MXAN_6908 6908exR ACATCGACGCGCTGTTGAAGGG Reverse primer for testing the expression of MXAN_6908 1．3 培养基与试剂 LB 培养基：胰蛋白胨10 g•L-1，酵母粉5 g•L-1，NaCl 10 g•L-1，pH自然，根据质粒抗性添加合适的抗生素。 TPM 培养基：10 mM Tris-HCl (pH 7.6)，8 mM MgSO4，1 mM KH2PO4，固体培养基添加15 g•L-1琼脂粉。 CTT培养基：10 g•L-1 酪胨，10 mM Tris-HCl (pH 7.6)，8 mM MgSO4，1 mM KH2PO4，固体培养基添加15 g•L-1琼脂粉或者半固体培养基添加7 g•L-1琼脂粉。 1/2 CTT培养基：5 g•L-1 酪胨，10 mM Tris-HCl (7.6)，1 mM KH2PO4，8 mM MgSO4，固体培养基添加15 g•L-1琼脂粉或者半固体培养基添加5 g•L-1琼脂粉[17-19]。 CYE培养基：10 g•L-1 酪胨，5 g•L-1酵母提取物，1 g•L-1 MgSO4，pH 7.6，固体培养基添加15 g•L-1琼脂粉,根据质粒抗性添加32 μg•mL-1 Kan。 MCM缓冲液：10 mM MOPS (pH 6.8)，10 mM MgCl2，1 mM CaCl2。 酪胨、酵母提取物以及琼脂粉购买于美国BD公司和Oxiod公司。刚果红和台盼蓝购买于Sigma公司。 LA Taq DNA聚合酶，2× GC buffer I，dNTPs，T4连接酶，限制性内切酶 EcoR I和Hind III等分子试剂均购于TaKaRa公司；其他实验试剂如无特殊说明均为分析纯。凝胶回收试剂盒与质粒提取试剂盒购自北京百泰克生物技术有限公司 (BioTeke Corporation) ，核酸测序委托南京金斯瑞生物科技有限公司 (Genscript BioTechnologies Co.,Ltd.) 。 (责任编辑：qin) |