云实内生菌Chaetomium globosumYSC5次生代谢产物研究(4)
时间:2018-07-11 21:48 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
1.2.4 菌株鉴定 形态学鉴定：参考魏景超（1979）《真菌鉴定手册》。采用光学电子显微镜观察菌株YSC5子囊和子囊孢的形态，获得光学图片。 分子学鉴定：采用DNA提取试剂盒N1191（广东东盛）提取内生菌DNA，利用通用引物ITS1（5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'）和ITS4（5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'）（White TJ 1990）进行ITS1-5.8S-ITS2区域的扩增。25 μL PCR扩增反应体系为：模板DNA 1 μL，PCR Kit P2052（广东东盛）12.5μL，DNA聚合酶1 μL（2.5U μL-1），引物各1 μL，超纯水8.5μL。94 °C变性4 min后，反应程序为94 °C 30秒，60 °C退火30s，72 °C延伸1min，共35个循环，72 °C最终延伸10min。PCR产物用1%凝胶电泳进行检测回收后测序，所测序列利用BLAST 软件进行序列相似性分析[11]。 1.2.5 菌株YSC5次生代谢产物分离纯化及鉴定 综合利用硅胶柱层析、薄层层析、重结晶等各种技术对发酵产物进行分离纯化。 化合物结构鉴定通过波谱技术（MS, 1H,13C-NMR和2D-NMR）等方法并结合文献鉴定这些化合物的结构。 (责任编辑：qin) |