蜜蜂螺原体黏附相关蛋白对宿主意蜂免疫的影响(2)
时间:2018-07-17 21:08 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
3 结论与讨论„12 致谢12 参考文献„„13 近年来爆发的蜜蜂“爬蜂病”被证实与螺原体侵染密切相关，常与孢子虫、慢性麻 痹病毒等混合感染蜜蜂，严重威胁着养蜂生产的发展[1]。 螺原体在分类上属于细菌域(Bacteria)，厚壁菌门(Firmicutes)，柔膜菌纲(Mollicutes) [2]，柔膜菌纲微生物是能进行自主复制的最小的生物之一，与其他细菌相比不同的地方 在于柔膜菌微生物缺乏细胞壁[3] 。 柔膜菌纲微生物在自然界中广泛传播并且能感染人类，其他哺乳动物，爬行动物， 节肢动物和植物，通常对于宿主和组织有很强的特异性，这是由于柔膜菌纲微生物专性 寄生。然而，包括植原体、螺原体和无胆甾原体在内的植物病原菌能够感染多种植物并 且以昆虫为寄主进行传播[4] 。 虽然螺原体和无胆甾原体相比植原体更容易被各种噬菌体感染，但是只有极少一部分被发现[5] ，这个存在于螺原体基因组内的大量的重复序列使得螺原体代表基因组序列 的测定变得十分困难。目前被研究的最多的是感染柑橘的螺原体(Spiroplasma citri) [6-7] 和感染玉米的螺原体(S. kunkelii) [6-8] 。螺原体(S. melliferum)能感染意大利蜜蜂(Apis mellifera)，是以昆虫作为寄主的螺原体的代表之一[9] 。 S. melliferum 发现于被感染的蜜蜂粪便中，同时沉积在开花植物上的粪便成为了健 康蜜蜂的感染源[10] .而存在于植物组织或其表面的螺原体不表现出复制性。螺原体通常 存在于宿主的肠道和血淋巴内，这暗示着螺原体侵染能引起宿主的免疫反应。 昆虫的体液免疫系统的启动通常源于宿主识别受体与病原相关分子模式的识别，已 有体内及体外实验证明，螺原体的黏附相关蛋白(ScARP3d)在螺原体作用于宿主细胞时 起到了直接作用[11] 。ScARP3d 的 C 端部分锚定于细胞膜上，N 端部分则裸露于螺原体 表面，并且存在许多重复序列，可能是某种受体的识别结构域。乳胶珠细胞黏连实验证 明ScARP3d 重复区(Rep3d)珠粒内在化依赖肌动蛋白的参与，暗示着 ScARP3d 的重复区 域能被宿主细胞表面的受体识别，从而实现螺原体对宿主细胞的黏附。并且 S. citri 也被 证实，缺失黏附相关因子的突变株对宿主细胞的黏附能力大幅下降[12] 。但黏附蛋白能否 引起宿主的免疫反应还不得而知。 早期研究表明，昆虫体液免疫会激活免疫信号通道引起防卫素抗菌肽(defensin)和溶 菌酶的合成，并激发酚氧化酶原级联系统，这会导致酚氧化酶(prophenoloxidase)活力的 上升，它们能协同作用并杀死入侵的微生物。因此，防卫素(抗菌肽)和酚氧化酶是昆虫 免疫相关的重要因子，我们以蜜蜂螺原体(S. melliferum)的黏附相关蛋白 ALP609 免疫意 蜂，测定意蜂的一系列免疫反应，希望能够揭示螺原体黏附蛋白与宿主免疫应答之间的 关系。 1 材料与方法 1．1材料 材料与菌株： 意大利蜜蜂 Apis mellifera 和实验室保存菌株 S. melliferum CH-1， 转化载体大肠杆菌 E. coli DH 5α，表达载体大肠杆菌 E. coli BL 21。 主要仪器： 表 1 本实验使用的仪器及来源 仪 器 来 源 电子天平S2202 和M214A 伯拉莫贝林精密仪器有限公司 梯度基因扩增仪 TaKaRa 无菌操作台 苏净集团安泰公司 全自动凝胶成像分析仪JS-680B 培清 D-1-70 型自动控制压力蒸汽灭菌锅 北京发恩科贸有限公司 (责任编辑：qin) |