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2。2。1  菌株筛选步骤论文网

采样    平板分离    斜面培养    摇瓶发酵    菌株获得

在淮安周边淀粉厂、米厂、庄稼地、食堂等地点采集样品，将所有的样品按一定比例稀释后，分别涂布于以马铃薯淀粉为唯一碳源的选择性平板上，放置于30℃恒温培养箱中2-3天，使其长出单菌落，用接种针挑出，在斜面上划线。从斜面上取出接种到平板上继续培养，没有染菌的平板上孢子长满后，接入以马铃薯淀粉作为唯一碳源的培养基中进行摇瓶产酶发酵。对发酵液的酶活进行测定，挑选出一株产酶量最高的菌株，保存以便进行下一步试验。

2。2。2  碳源优化

在发酵培养基中利用不同的碳源进行发酵，测定酶活，选出最优碳源，并以此碳源进行下一步无机氮源优化。

2。2。3  无机氮源优化

将不同的无机氮源加入到发酵培养基中进行产酶发酵，通过酶活高低选出最佳无机氮源，并以此无机氮源和上一步优化得出的碳源进行下一步有机氮源的优化。

2。2。4  有机氮源优化

各种不同的有机氮源添加到发酵培养基中发酵，提取粗酶液后测定酶活，酶活越高越好。

2。2。5  正交试验

在单因素实验结果的基础上，选定几种因素的不同水平进行正交实验。

2。2。6  酶活测定

以Na2HPO4-柠檬酸缓冲液（pH5。0）配制的2%马铃薯淀粉悬浊液为底物，反应体系为：1mL粗酶液，4mL马铃薯淀粉悬浊液。将上述反应体系置于摇床中，设定摇床温度为40℃，设定反应时间为30min，摇床转速为150r/min。反应结束后用移液枪取出1ml上清液置于1。5ml离心管中，在10000rpm离心3min后，用移液枪取上清液置于用生物传感分析仪检测葡萄糖含量。 

酶活力单位定义：在上述条件下，1min释放1μg葡萄糖的酶量定义为一个酶活力单位，用U表示。

2。2。7  最适pH的测定文献综述

用不同pH值的底物与酶反应后，测定生淀粉糖化酶活力。

2。2。8  最适温度的测定

在其他反应条件相同的情况下，测定在不同温度下的酶活。

2。2。9  金属离子对酶活影响的测定

激活剂当中大部分是无机离子或简单的有机化合物，在相同反应条件下，将酶与不同浓度金属离子加入到底物当中，通过酶活高低确定具有最佳促进作用的金属离子。