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目前已有大量的基于有机荧光基团如香豆素[8]、罗丹明[9]等的小分子GSH探针被设计出来，2008年，Chmielewski等设计出以罗丹明110为荧光母体，以二硫键作为与GSH反应的基团的GSH探针RhoSS。2012年Murthy等将香豆素荧光基团和二硫键相连直接合成了能在细胞中能就GSH/GSSG的不同结构状态分别显示出不同荧光的化合物，从而达到了对细胞不同氧化还原状态的检测[10]。

本文设计的腈基杂环探针是针对GSH对二硫键的还原作用设计的，在有机溶剂中，用异佛尔酮和丙二腈通过克脑文盖尔反应合成腈基杂环化合物TCM（3,5,5-三甲基-2-环己烯亚基丙二腈），再与由对硝基苯甲醛合成而来的对叠氮基苯甲醛反应生成TCM-N3，将TCM-N3还原成TCM-NH2，TCM-NH2与二硫代二乙二醇反应生成针对GSH的探针TCM-S。

探针TCM-S设计路线图如图1所示：

图1。 含二硫键荧光探针设计路线图

2 材料和方法

2。1 材料和仪器文献综述

异佛尔酮 ACROS试剂公司；丙二腈 上海阿拉丁生化科技股份有限公司；三水合乙酸钠、叠氮化钠、甲基叔丁基醚、哌啶（六氢吡啶）、无水硫酸钠、无水乙醇、浓盐酸、乙酸乙酯、六甲基磷酰三胺（HMPA）国药集团化学试剂有限公司；对硝基苯甲醛 上海源叶生物科技有限公司；氯化亚锡 上海九亿化学试剂有限公司；三光气 上海麦克林生化科技有限公司；二氯甲烷 天津市恒兴化学试剂制造有限公司；石油醚 南京化学试剂股份有限公司；二硫代二乙二醇 东京化成工业株式会社；乙腈（除水） Burdick&Jackson；四氢呋喃（THF） 中国五联化工厂。

BS224S、TE612-L电子天平 北京赛多利斯仪器系统有限公司；JJ-精密增力电动搅拌器 江苏金坛市佳美仪器有限公司；SHZ-Ⅲ型循环水真空泵、旋转蒸发器 上海亚荣生化仪器厂；DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器；601型搅拌式电极架 上海三信仪表厂；X-5显微熔点测定仪（控温型) 北京泰克仪器有限公司；单口烧瓶、冷凝管、层析柱 上海垒固仪器有限公司。核磁共振波谱仪（Advance Ⅱ-400 MHz） 瑞士布鲁克拜厄斯宾有限公司（Bruker Biospin）。

2。2 实验方法

2。2。1 TCM的合成[11]

 在250ml单口烧瓶中，加入异佛尔酮13。8g（0。1mol），丙二腈6。6g（0。1mol），无水硫酸钠4g（0。05mol），再加入90ml无水乙醇，震荡溶解，在50℃下搅拌反应过夜。反应过程中颜色变黑，待反应结束，蒸发浓缩至液体一半体积，4℃下保存半小时，过滤得粗产物，再将粗产物用无水乙醇重结晶得到纯的产物。产物表征数据1H NMR(400MHz, CDCl3) δ6。61（d,J=1。36 1H）,2。51（s,2H）,2。17(s,2H),2。03(d,J=0。8,3H),1。01(s,6H)。约11。0克，产率约53。9%，熔点73。5℃-75。3℃。