1。2。2水培法

一周后，将长势一致的幼苗转移到含有1L 1/5 Hoagland培养液的培养罐内，进行预培养。预培养2天后，将番茄幼苗转移到含有10μM CdCl2的上述培养液中（每块植物固定板上有20个孔，每孔1株幼苗，其中AC和M1幼苗各10株）进行培养，隔天更换培养液。外源添加实验中，硝酸还原酶（nitrate reductase, NR）抑制剂处理浓度分别为：钨酸钠tungstate 0。1 mM、甘氨酸（Gly）为0。5 mM、氯化铵（NH4+）为1。0 mM；一氧化氮合酶( nitric oxide synthase, NOS)抑制剂L-NAME ( Nw-nitro-L-arginine methyl ester hydrochloride )为0。2 mM；NO猝灭剂cPTIO (2-(4-Carboxyphenyl)-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-l-oxyl-3-oxide)为0。5 mM；NO供体硝普钠（sodium nitroprusside, SNP）为100 mM 。

1。3 Cd含量测定

野生型AC和突变体M1幼苗于正常无Cd或含Cd的培养液中培养，7天后分别取地上部分和根系，于65℃ 烘焙至恒干重，用浓HNO3消化，稀释液中的Cd含量用ICP-MASS (Perkin Elmer)法测定。

1。4根系活体NO荧光染色文献综述

根系NO含量主要采用DAF-FM DA(diaminofluorescein-FM diacetate )活体组织免疫荧光法测定，具体步骤如下：

1）截取番茄幼苗根尖约5mm，用5μM DAF-FM DA探针充分覆盖其表面。

2）置于25℃ 暗室中反应20min进行探针的装载。

3）用磷酸缓冲液 (PBS，pH 7。4)冲洗根系细胞，为避免探针的残留需冲洗3次以上。

4）用荧光显微镜（Nikon Eclipse 80i，激发波长495 nm，发射波长515 nm）观察并拍摄图象，并用Photoshop软件对根系NO荧光强度进行量化处理