水稻分蘖相关基因F17的克隆(2)

The candidate responsible geneencodes a glucose 6-dehydrogenase。 Therefore, in order to further determine whether F17 holds glucose 6-dehydrogenase enzyme activity, we try to induce and purify the F17 protein and to explore its enzyme acitivity in vitro。 We amplified the F17 CDS and inserted it into expression vector pET28a to acquire a F17-HIS tag fusion protein。 We found the size of induced protein is correct, and it is easier to make the protein in the supernatant under the lower temperature induction。 In addition, the concentration of IPTG has no benefit on the protein induction and purification。 All together, we had established the preliminary protein induction and purification conditions of F17 and studies should be explored in near future to acquire a high-quality proteins。

Keyword: rice； Tillering； map-based cloning；Protein

摘要 2

Abstract 3

目录 4

0 引言 5

1 材料与方法 5

1。1 实验材料 5

1。2 实验方法 5

1。2。1 基因定位 5

1。2。1。1 DNA的提取 5

1。2。1。2 PCR扩增 6

1。2。1。3琼脂糖凝胶电泳 6

1。2。1。4 F17基因来自优Y尔L论W文Q网wWw.YouERw.com 加QQ7520~18766 定位 6

1。2。1。5 确定候选基因及测序 6

1。2。2 F17蛋白的体外诱导及纯化 7

1。2。2。1 表达载体的构建 7

1。2。2。2 IPTG诱导蛋白表达 8

1。2。2。3蛋白的纯化 9

1。2。2。4 SDS-PAGE电泳 9

2 结果与分析 10

2。1 分蘖减少突变体f17的形态特征 10

2。2 F17基因的图位克隆 11

2。2。1 F17基因初定位 11

2。2。2 F17基因的精细定位 11

2。2。3 确定候选基因及测序 11

2。2。3 F17基因的蛋白诱导与纯化 11

3 讨论与展望 12

参考文献 13

0 引言

水稻的株型有两大构成因素，而分蘖就是其中之一，对于目前世界上的优良水稻品种，如 “超高产新株型”、 “中国超级稻”、“超级杂交稻”等等，水稻的分蘖数都是其核心部分[1]。同时，分蘖作为水稻的一种重要农艺性状，影响着单位面积上水稻的穗数，从而影响单位面积水稻的产量。由此可见，水稻的产量与分蘖这一性状是密不可分的。分蘖是单子叶植物一种特殊的分枝现象，其形成过程可分为两个步骤，第一个步骤为分蘖芽的形成，第二个步骤为分蘖芽的伸长[2-3]。目前，分蘖的形态学和组织学等方面已经研究得较为清楚，不过分蘖主要受遗传控制的[3-5]，且很容易受到环境条件的影响。尽管国内外科学家对于水稻分枝机理方面已进行了广泛研究，但是，目前人们对于水稻分蘖的形成机理仍不十分清楚。论文网水稻分蘖相关基因F17的克隆(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_190666.html