近年来，水稻分子生物学以及水稻基因组研究取得了快速的发展，越来越多与水稻分蘖相关的基因已经被克隆了，如MOC1 基因、D3 基因等，这使得人们对水稻分蘖发生的分子机理有了更深入的理解。并且，人们还可以将这些机理运用到水稻的育种中去，以此来提高水稻的产量。目前，科学家已经发现27个影响分蘖数目的数量性状位点（QTLs），它们分布在11条染色体上[6]。MOC1基因，是李家洋等[7]以水稻天然寡分蘖突变体moc1为材料，用图位克隆的方法克隆得到的，这是第一个鉴定到的控制水稻分蘖数目的基因。D3 基因[8]是以多蘖型矮秆突变体Id3 为材料，同样是采用图位克隆的方法分离出来的与水稻分蘖相关的基因。由此可见，运用图位克隆的方法分离和克隆基因，已经成为分离生物基因的一种常规方法。

图位克隆(map-based cloning)，又叫做定位克隆(positional cloning)，它最先由剑桥大学的Coulson 提出[9]。图位克隆的基本遗传学原理是：在基因组中，基因具有相对稳定的位置，它是通过分析突变位点与已知分子标记的连锁关系，对突变体突变表型的遗传基础进行确定[10]。目前，已有几十种DNA 分子标记技术用于基因定位的研究，其中最为常用的分子标记技术是简单序列重复(simple sequence rEPeat,SSR)和单核苷酸多态性(single ucleotide polymorphisms,NPs)11-12]。本次试验，我们拟通过分离水稻分蘖减少突变体，继而运用图位克隆的方法分离和克隆水稻分蘖相关基因。

1 材料与方法

1。1 实验材料

通过EMS 诱变籼稻品种蜀恢获得了一个分蘖减少突变体f17，利用该突变体与亲本蜀恢回交获得F1代，挑选含有突变体性状的水稻与野生型粳稻品种日本晴杂交，获得F2 代，从F2 代中挑选出200株分蘖减少突变体用于基因定位。

1。2 实验方法

1。2。1 基因定位

1。2。1。1 DNA的提取

本实验采用TBS法提取DNA，步骤如下：

1）剪取5cm左右长的水稻叶片，置于2 mL EP 厚壁管中，加入一颗钢珠，放入液氮中速冻，然后置于全自动样品快速研磨仪中，40 HZ频率下震荡研磨1 min；

2）加入400μL TBS提取液，震荡混匀；文献综述

3）75℃水浴锅中放置30-40min，期间需轻轻晃动（每隔10min）；

4）12000rpm离心10min，吸取200μL上清液至新的EP管中；

5）加入200μL异丙醇（4℃），混匀，4℃环境下静置5min；

6）12000rpm 离心10min，去掉上清部分；

7）吸取200μL 75%的乙醇溶液于上述EP管中，用枪轻轻吸打；

8）8000rpm离心5min，倒掉酒精，晾干；

9）加入200μL ddH2O， 置于-20℃冰箱中保存；

1。2。1。2 PCR扩增

20μL PCR反应体系如下：

      组分 Component                       体积 Volume（μL）

       2×Taq Mix                               10

         Forward primer（5μM）                      1

Reverse primer（5μM）                      1

            DNA                                   2

ddH2O                                  6

   PCR扩增反应的程序如下： 水稻分蘖相关基因F17的克隆(3):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_190666.html