拟南芥核糖体大亚基L10C基因的功能研究(3)

1、RPL10参与抗病毒机制来自优Y尔L论W文Q网wWw.YouERw.com 加QQ7520~18766

植物与病原的互作是植物生物学领域的研究热点之一，过去的研究表明植物运用两种方式来对抗病毒的入侵：一是利用RNA沉默，这通常会被共同进化的病毒抑制因子所抑制，从而提高易感宿主的病毒致病性；二是利用含核苷酸结合域和富含亮氨酸重复序列（NB-LRR）的抗性蛋白质，这与免疫性防御机制相类似。

在近期，C Zorzatto等人（2015）研究发现RPL10蛋白可以通过穿梭到细胞核内，通过与MYB类似蛋白互作，形成L10-INTERACTING MYB DOMAIN-CONTAINING PROTEIN复合物（LIMYB）来下调整个翻译系统调节下的基因表达，从而增强植株对菜豆金色花叶病毒的耐性。该新发现为植物抗病毒机制研究提供了一个全新的思路[8]。

2、RPL10在其他领域的研究

Klauck等人以小鼠进行实验，利用RNA原位杂交的技术发现在小鼠的海马体内存在高表达的RPL10。基于这些研究结果，提出了自闭症的翻译功能障碍的模型来研究那些受大脑边缘系统调控的认知功能障碍的问题[9]

陈心利用RACE-PCR、Real-time PCR 和生物信息学等方法对大黄鱼和眼斑拟石首鱼的RPL10/QM-like 基因（QM-like基因编码的是具有24-26 kDa的分子质量的核糖体蛋白L10）及其表达产物进行了研究。获得了该基因的cDNA 全长，分别命名为PcQM（Larimichthys crocea QM-like protein gene, complete cds。）和SoQM（Sciaenops ocellatus QM-like protein gene, complete cds）。同时对攻毒后大黄鱼脑、鳃、心脏、头肾、肠、胃等组织进行了分析，发现在所有被检测的组织中PcQM均有分布[10]。随即以现有的鱼类RPL10/QM-like AA 序列为基础，构建了分子系统进化树。进化树首先被分为脊椎动物和非脊椎动物两大枝，同时海洋鱼类聚在一起，淡水鱼聚在一起。并从中推测，RPL10/QM-like 蛋白在进化过程中，与生物起源及其生活环境等因素有关[11]。论文网

由此可见，RPL10不仅仅是作为我们常规说认识的仅仅只是构成核糖体的亚基的一个成员，其还具有进化上的意义及其他重要的生物学功能。RPL10的一些生物学功能至今未被发现，非常幸运实验室进行了拟南芥的RPL10基因功能的研究时，发现PVX/AtRPL10A重组病毒接种本氏烟草后，由于PVX病毒诱导了本氏烟草内源基因（RPL10A同源基因）的沉默（Virus induced gene silence,VIGS），导致植株矮化及病斑加重，同时还对育性也有严重的影响。而拟南芥拥有三个同源基因[12]，我毕业设计研究的课题便是考察PVX/AtRPL10C是否拥有类似功能，能够改变本氏烟草的表型。

1、材料与方法

1。1实验材料以及设备

植物材料：

拟南芥（Arabidopsis thaliana, ecotype Columbia）Col-0，本氏烟草（Nicotiana benthamiana）

质粒：

PVX/AtRPL10C质粒

分子生物学试剂：

限制性内切酶Spe I –HF（R3133L）、T7 RNA聚合酶（M0251L）和m7G(5’)ppp(5’)G RNA帽结构类似物（S1404L），均购自New England Biolabs；

rATP，rCTP，rUTP，rGTP（N0466），均购自New England Biolabs 公司文献综述

RNA酶抑制剂（N2611），购自 Promega公司；

酚/氯仿（K169-400ML），购自 Amresco 公司。

实验室设备：

温度梯度PCR仪（BioRad公司），凝胶成像仪（BioRad公司），Nikon单反相机（D5300），金属浴（Eppendorf公司），MiliQ超纯水系统（Milipore公司），高压灭菌锅（HVE-50型，Hirayama公司），低温离心机（Eppendorf公司），超低温冰箱（Thermo Fisher Scientific公司），超净台（苏州苏净），生物安全柜（Thermo Fisher Scientific）， NanoDrop微量分光光度计（Thermo Fisher Scientific），控温摇床（Thermo Fisher Scientific），细菌培养箱（Thermo Fisher Scientific），强制对流烘箱（UFMEMMERT公司），核酸蛋白质电泳系统(BioRad)，电子天平（METTLER TOLEDO）。拟南芥核糖体大亚基L10C基因的功能研究(3):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_196249.html