2 材料与方法

2.1材料与仪器

菌种: 里氏木霉Rut C-30: 淮阴师范学院生命科学学院实验室保藏

PDA培养基：

马铃薯葡萄糖培养基是一种用来培养真菌的半合成培养基。此培养基是由马铃薯，葡萄糖，琼脂等组成。其中马铃薯煮汁可以提供碳源，氮源，无机盐和维生素等，葡萄糖主要作为碳源，琼脂为凝固剂。马铃薯的表皮中含有龙葵碱的化学成分，对菌丝生长有抑制作用，所以马铃薯在使用时要去皮。在PDA培养基上大多数真菌都可以良好生长。由于多数真菌喜欢偏酸性环境，而培养基灭菌过程中部分糖类会转化为酸，所以一般不需要调pH值。马铃薯浸出粉有助于各种霉菌的生长；葡萄糖提供能源；琼脂是培养基的凝固剂灭菌倒平板后的培养基24小时后未长杂菌为合格培养基，按无菌操作进行。

试剂和材料

马铃薯去皮      200g

葡萄糖          20g

琼脂            20g

水              1000mL

种子培养基[17]

玉米浆种子培养基：0.2%玉米浆、0.14%硫酸铵、0.03%硫酸镁、0.1%葡萄糖、0.2%磷酸二氢钾，分装3ml在15*150mm的试管中，加塞子，120℃灭菌20分钟。

基本培养基

1.4g        (NH4)2SO4

2.0g        KH2PO4

0.3g        Urea

0.3g        CaCl2

0.3g        MgSO4•7H2O

0.005g      FeSO4•7H2O

0.0016g     MnSO4•H2O

0.002g      CoCl2

1%Avicel(微晶粉末纤维素)   0.3%（W/V）peptone(蛋白胨)  

微量元素 100X

0.5g   FeSO4•7H2O

0.16g  MnSD4•H2O

0.2g   CoCl2

DNS

蒸馏水：                      1461ml

3，5-二硝基水杨酸（DNS）     10.6g

氢氧化钠                      19.8g

酒石酸钾钠                    306g

苯酚（50℃溶化）              7.6ml

偏亚硫酸钠                    8.3g

柠檬酸缓冲液

柠檬酸                        210g

蒸馏水                        750ml

氢氧化钠（加到、pH3.8）         40-60g  (9.5g）

柠檬酸缓冲液（50mM，pH4.8)

将柠檬酸原缓冲溶液与蒸馏水按：1:19的比例进行稀释，之后用NaoH溶液调节pH至4.8。

仪器

超净工作台：HDL APPARATUS

恒温振荡箱：哈尔滨市东联电子技术开发有限公司

恒温培养箱：哈尔滨市东联电子技术开发有限公司

台式低速离心机：Eppendorf centrifuge 5418

恒温水浴锅：上海精密实验设备有限公司

pH计：上海精科

立式电热压力蒸汽灭菌器：日产

光栅分光光度计：上海元析仪器有限公司

原料

马铃薯、琼脂、无菌水

预处理的秸秆、玉米浆：淮安市百麦绿色生物能源有限公司

葡萄糖、硫酸铵、尿素、乳糖、低聚木糖、酒石酸钾钠、苯酚、偏重亚硫酸 

钠、柠檬酸均购于国药集团化学试剂有限公司，分析纯AR 不同的C源对里氏木霉产纤维素酶的影响的研究(3):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_62255.html