2.1.8 正交试验 11

2.2 实验结果与讨论 11

2.2.1 正交试验 11

2.2.2 酶活稳定性 13

2.3 结论 15

3 漆酶用于染料脱色的实验研究 16

3.1 材料与方法 16

3.1.1 染料 16

3.1.2 主要的仪器和试剂 16

3.1.3 染料最大吸收波长确定 17

3.1.4 游离漆酶脱色实验 17

3.1.5 树脂固定化漆酶脱色实验 17

3.2 实验结果与讨论 17

3.2.1 靛蓝染料的脱色 17

3.2.1.1 靛蓝溶液最大吸收波长确定 17

3.2.1.2 靛蓝溶液脱色实验 18

3.2.1.3 树脂固定化脱色 20

3.2.2 活性艳兰X-BR染料的脱色 22

3.2.2.1 活性艳兰X-BR溶液最大吸收波长确定 22

3.2.2.2 活性艳兰X-BR溶液脱色实验 23

3.3 脱色实验结论 28

结  论 29

致  谢 30

参考文献 31

 1 绪论

1.1 漆酶

1.1.1 漆酶的来源

漆酶(Laccase，E.C.1.10.3.2)是一种含铜的多酚氧化酶，1883年由Yoshida 在漆树生漆中发现[1]，漆树分泌物中的一种蛋白质可催化漆的固化过程，1894年Berteand将这种蛋白质命名为漆酶。漆酶不仅存在于漆树的分泌物中，而且存在于多种植物、昆虫和高等真菌中，其中最主要的产漆酶者是担子菌纲中的白腐真菌类[2]。

1.1.2 漆酶的理化性质

漆酶是一种糖蛋白,肽链一般由500个左右氨基酸组成,糖配基占整个分子的10%～45%。糖组成包括氨基己糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖、岩藻糖和阿拉伯糖等。由于分子中糖基的差异，漆酶的分子量随来源不同会有很大差异，甚至来源相同的漆酶分子量也会有所差异。

多数真菌漆酶的反应温度在25~50℃之间，也有耐高温真菌漆酶的报道；最适反应pH值在4.0~6.0之间，同一漆酶的作用底物不同，其最适pH值也有所差异。真菌漆酶多为酸性蛋白质，等电点在3.0~6.0之间。文献综述

不同漆酶的作用范围也不尽相同，涉及的底物主要包括单酚、领苯二酚、对苯二酚、甲氧基酚、抗坏血酸、二胺化合物（如苯二胺、多巴胺等）。

组成漆酶的数种同工酶均具有以下共同点：（1）都为糖蛋白；（2）都为单体酶，分子中一般都含有4个铜原子；（3）适合反应温度较低，酸性pH条件下催化效率较高；（4）具有广泛的底物专一性[3]。

1.1.3  漆酶的结构

酶的结构具有多维性，漆酶也不例外。漆酶的一级结构指的是其氨基酸序列，亦即漆酶单一肽链的线性组成，其中涉及漆酶重要功能的氨基酸组成在不同种类的漆酶间有一定的相似性和保守性，这种保守性在判定漆酶同源性和物种进化中有着重要地位。漆酶的二级结构指漆酶肽链折叠的规则方式，主要是熵效应的驱动，与一级序列密不可分，常见有α螺旋、β折叠、β转角以及无规卷曲等类型。在二级结构基础上，α螺旋、β折叠等二级结构元件搭配构成漆酶的结构域。这些结构域彼此作用构成漆酶的三级结构。