AHL分子荧光法检测质粒的构建(9)
② 称量凝胶的重量，以1mg=1µL换算凝胶的体积。
③ 按照凝胶浓度，按下表提供的参数加入相应比例的Binding Buffer Ⅱ。
凝胶浓度 Binding Buffer Ⅱ
————————————————————————————
小于或等于1% 4个胶体积
小于或等于1.5% 5个胶体积
小于或等于2% 6个胶体积
大于2% 7个胶体积
④ 置于50~60℃水浴中10分钟，使胶彻底融化，加热融胶时，每2分钟混匀一次。
（当所需要的DNA片段小于500bp或大于4kp时，需要在不同浓度凝胶的融胶液中加入一个胶体积的100%的异丙醇混匀。）
⑤ 将融化的胶溶液转移到套放在2mL收集管内的UNIQ-10柱中，室温放置2分钟。8,000rpm室温离心1分钟。
（如果融胶吼的总体积大于700µL，可以加样2次以上进行分别离心。）
⑥ 取下UNIQ-10柱，倒掉收集管中的废液，将UNIQ-10柱放入同一个收集管中，加入500µL Wash Solution，8,000rpm室温离心1分钟。
⑦ 重复步骤6一次。
⑧ 取下UNIQ-10柱，倒掉收集管中的废液，将UNIQ-10柱放入同一个收集管中，12,000rpm室温离心2分钟。
（将离心立新后的UNIQ-10柱放入恒温箱中50℃干燥5分钟，或自然晾干10分钟，有助于酒精的会发，提高DNA的洗脱效率。）
⑨ 将UNIQ-10柱放入一根新的1.5mL离心管中，在柱子膜中央加40µLElution Buffer放置5分钟。
（将Elution Buffer加热到60℃或者直接将Elution Buffer加入到 UNIQ-10柱中后60℃温育5分钟，有助于提高DNA的洗脱效率；也可以用双蒸水，用1M的NaOH将pH值调节到8.5后，再60℃洗脱。）
⑩ 12,000rpm室温离心1分钟，离心管中的液体即为回收的DNA片段，用琼脂糖凝胶电泳验证是否回收到DNA片段（见图3-4）。
（下文中若无特别说明，所提到的割胶回收皆按以上步骤操作。）
（3）载体质粒PLuxR的酶切
① 反应体系：
AatⅡ 2μL
10×Buffer Tango 2μL
DNA 5μL
无菌水 up to 20μL
② 轻柔地翻转几秒，使反应液混合均匀。
③ 在37℃下孵育5h。
④ 在65℃下放置20min使酶失活。
⑤ 用琼脂糖凝胶电泳验证（见图3-5）。
（4）pLuxR的去磷酸化处理
① 反应体系：
Alkaline Phosphatase 2μL
10×Alkaline Phosphatase Buffer 5μL