昆仑雪菊黄酮的提取及其抗氧化抑菌效果评价(5)
(7)双水相萃取分离法 双水相萃取是依据物质在两相间的选择性分配，提取有效成分。在双水相体系中，由 于表面性质、电荷作用和各种力(氢键和离子键等)的存在，物质在两相中的浓度不同。针对被分离的物质，研究者选择合适的体系，控制适当的条件就可以达到分离的目的。周清 等将超声波技术和双相萃取技术祸合用于提取旱莲草中总黄酮，通过单因素实验得出最佳 提取条件为:硫酸按用量120mg/mL，丙醇50%(体积分数)，液料比1: 30，超声提取30 min， 此时总黄酮平均得率为4.22%，优于加热回流提取。
（8）其他 赵二劳等考察了表面活性剂协同微波提取金莲花黄酮的工艺，筛选出了具有明显增效 作用的表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)，最后通过正交实验优化了提取工艺。
1.6 黄酮抗氧化能力的研究
（1） 化学发光法 是检测自由基的灵敏~准确的方法a其原理是鲁米诺(LuminoL,5-胺基-邻苯二甲酰环肼)被活性氧自由基氧化成激发态的氨基肽盐离子a当其返回基态时放出大量光子a从而对化学发光起放大作用O自由基产生越多a其发光值就越大a反之亦然O根据发光值的大小可反映系统中自由基的量O包括1次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶-鲁米诺体系和邻苯三酚-鲁米诺-碳酸盐缓冲液体系(检测O2清除能力)a邻菲罗琳-Cu2+-抗坏血酸-过氧化氢发光体系(检测HO~清除能力)aH2O2-鲁米诺-碳酸盐缓冲液(检测H2O2清除能力)及H2O2-溴代十优尔烷基三甲铵(CTMAB)化学发光法(检测H2O2清除能力)等[33]，而吖啶脂(AcLidiniumesteL,AE)类发光剂[34]不需催化剂的存在，在有过氧化氢的稀碱溶液中即能发光，反应迅速，发光量与AE浓度呈良好的线性反应，另外流动注射化学发光法[35]则使非平衡状态下的化学分析成为可能，具有良好的应用前景。
（2） 分光光度法 是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度 对该物质进行定性和定量分析的方法 定量分析的基础仍然是Lam-bert-Beer定律包括优尔根过氧化物酶法HRP,HRP-莨菪亭法,HRP-高香草酸法,检测H2O2清除能力[36],Fenton反应产生HO的水扬酸法和铁氧化邻二氮菲法,邻苯三酚自氧化法,肾上腺素法,氯化硝基四氮唑蓝法,NBT,法和细胞色素C还原法,检测O2清除能力等[33]。
1.7黄酮的抑菌研究
近年来，黄酮类化合物以其广谱的抑菌作用和生理活性，引起了世界各国研究、开发、利用的热潮。我国植物资源丰富，且几乎所有植物的花、叶、茎中都含有一定量的类黄酮，但在其开发利用中还存在很多问题，限制了类黄酮的进一步开发与利用。
类黄酮对许多病原微生物都具有广谱抗菌特性，其抗菌机制学说主要有以下几种。CouLd[18]指出，由于类黄酮是一种多酚类物质，可通过破坏细胞壁及细胞膜的完整性，导致微生物细胞释放胞内成分而引起膜的电子传递、营养吸收、核苷酸合成及ATP活性等功能障碍，从而抑制微生物的生长。殷彩霞等人[19]指出，类黄酮及其衍生物一般呈弱酸性（pH值为6），能使蛋白质凝固或变性，故有杀
菌和抑菌作用。韩淑琴等人[20]通过透射电镜观察，仙人掌醇提物随着时间的延长，对微生物的菌体结构造成破坏，使菌体扭曲变形，进而细胞壁破裂，内容物外漏，直至成为空壳或分解为颗粒状残渣；聚丙烯酰胺凝胶电泳显示，仙人掌提取物作用使菌体内蛋白质减少，对大分子蛋白质有破坏或抑制其合成的作用。Katarzyna等人[21]考察了金雀异黄酮对细菌细胞的影响。结果表明，加入类黄酮改变了哈文氏弧菌的细胞形态（形成丝状体细胞时），抑制了细菌细胞DNA和RNA的合成。同时，蛋白质合成也明显被抑制，但有所延迟。
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