1。4。1影响细胞结构
可通过扫描电镜、透射电镜或激光扫描共聚焦显微镜等手段,观察抑菌物质对菌体细胞的作用效果,进而确定抗菌物质对细胞的总体作用靶位。Yun Seok[9]发现茶多酚对金黄色葡萄球菌、脑膜炎奈瑟菌、大肠杆菌等多种致病菌具有良好的抑菌性能,利用扫描电镜观察菌体的形态,发现细胞出现不同程度的聚集和穿孔,且茶多酚影响细胞膜的形成,不利于细菌的附着和侵染。
1。4。2 影响细胞壁膜稳定性
细胞膜是细胞代谢活动的重要部分,兼有物质转运及选择性渗透的功能,与细胞壁协同进行胞内外的物质交换作用,且细胞膜上的多种物质合成酶可参与肽聚糖、脂多糖、磷脂等诸多物质的合成[10]。抑菌物质会破坏菌体细胞壁膜上酶系的活性及通透性而产生抑菌作用。细胞膜被破坏后,菌体的屏障保护作用消失、酶系会失活、细胞内容物质也会外流,会影响细胞的正常生理活动。代建丽[11]等通过测定菌液电导率、碱性磷酸酶和胞外蛋白等含量变化来研究白芨多糖对大肠杆菌的抑菌机理,结果表明白芨多糖通过改变大肠杆菌细胞壁和细胞膜的通透性,使细胞代谢发生紊乱而抑制其生。
2 蝉花多糖的提取、抑菌活性及抑菌机理研究
2。1实验材料与仪器
2。1。1。实验材料
以下试剂皆为分析纯(AR)
氯化钠:生物工程(上海)有限公司
胰蛋白胨:国药化学试剂有限公司
酵母粉:国药化学试剂有限公司
琼脂粉:国药化学试剂有限公司
无水乙醇:国药化学试剂有限公司
磷酸氢二钠:国药化学试剂有限公司
磷酸二氢钾:国药化学试剂有限公司
氯化铵:国药化学试剂有限公司
硫酸镁:国药化学试剂有限公司
氯化钾:国药化学试剂有限公司
氯化钙:国药化学试剂有限公司
乳糖:国药化学试剂有限公司
β-巯基乙醇:阿拉丁生物科技有限公司
氯仿:国药化学试剂有限公司
正丁醇:国药化学试剂有限公司
苯酚:国药化学试剂有限公司
硫酸:国药化学试剂有限公司
盐酸:国药化学试剂有限公司
冰乙酸:国药化学试剂有限公司
氢氧化钠:国药化学试剂有限公司
PBS:国药化学试剂有限公司
1。5 M Tris-HCl(pH8。8):生物工程(上海)有限公司
0。50 M Tris-HCl(pH6。8):生物工程(上海)有限公司
Acryl(丙烯酰胺):阿拉丁生物科技有限公司
APS(过硫酸铵):阿拉丁生物科技有限公司
蛋白上样缓冲液:阿拉丁生物科技有限公司
结晶紫染液:国药化学试剂有限公司
95 %乙醇:国药化学试剂有限公司
牛津杯:东台市昌吉仪器设备厂
ONPG(邻-硝基酚-β-D-半乳糖苷):阿拉丁生物科技有限公司
Triton X-114(曲拉通):生物工程(上海)有限公司
2。1。2实验仪器
电子天平:奥豪斯仪器(上海)有限公司
冰箱:青岛海尔电器有限公司文献综述
超低温冰箱:日本Sanyo公司
普通光学显微镜:日本尼康公司
分光光度计:日本岛津有限公司
酶标仪:日本岛津有限公司
微波炉:广东格兰仕集团有限公司
旋转蒸发仪:上海亚荣科技有限公司
高压蒸汽灭菌锅:致微(厦门)仪器有限公司
恒温培养箱:上海精宏实验设备有限公司
恒温振荡器:太仓市实验设备厂