Keywords: Dendrobium; Germplasm resources; Genetic Diversity; SSR

目 录

1 引言 6

1。1 石斛介绍 6

1。2 石斛多样性研究进展 6

1。3 SSR标记技术概述义 7

1。3。1 SSR标记技术的原理 7

1。3。2 SSR标记技术的特点 7

1。3。3 SSR标记技术的应用 7

1。4 石斛多样性研究的意义 7

1。5 本研究的内容及意义 8

2 材料与方法 9

2。1 材料 9

2。2 实验方法 10

2。2。1 DNA的提取 10

2。2。2 石斛SSR分子标记引物筛选 11

2。2。4 PCR扩增反应 11

2。2。5 聚丙烯酰胺凝胶电泳 11

2。2。6 目的DNA片段From优Y尔E论W文W网wWw.YouERw.com 加QQ75201,8766 回收 12

2。2。7 TA克隆 13

3 结果 14

3。1 石斛SSR分子标记引物筛选 14

3。2 石斛SSR分子标记电泳结果 14

3。3 石斛目的DNA片段测序结果 16

3。4 石斛种质资源遗传多样性分析 19

4 讨论与分析 20

致 谢 22

1 引言

1。1 石斛介绍

石斛（Dendrobium nobile Lindl）是兰科(Orchidoideae)石斛属(Den-drobium Sw)植物的统称，在全球大约有1500种，分布在亚洲热带、亚热带及大洋洲地区。目前，在我国约有74种，野生石斛大多生长在阴凉潮湿的地方，由于近几年采挖严重，野生石斛越来越少，而大棚种植的石斛大多为杂交品种，在浙江省、云南省、广西省等药用植物种植大省分布较多[1]。石斛属植物不仅有观赏性可作为观赏植物而且有较高的药用价值可用于生产铁皮枫斗等药品，有“四大观赏洋兰”的美称，具有止咳、清热、解毒、护眼、增强抵抗力等效果，主要含有植物多糖、生物碱等成分[2, 3]。以石斛为主要原料生产的铁皮枫斗等药品在市场上需求巨大，具有很高的经济价值。论文网

1。2 石斛多样性研究进展

1。3 SSR标记技术概述义

1。3。1 SSR标记技术的原理

SSR分子标记是用具有特异性的引物进行聚合酶链式反应的技术，也称微卫星DNA，在基因组DNA核苷酸序中由一到六个核苷酸组成，广泛存在于动物、植物、微生物等基因组中，主要位于核苷酸序列的编码区和非编码区，片段较小，一般来说大都小于200bp左右[9]。但是在真核生物DNA中，微卫星标记的侧翼核苷酸序列大都是比较保守的核苷酸序列，所以我们把微卫星保守的核苷酸序列进行复制，然后检测目的DNA片段的核苷酸序列，根据获得的核苷酸序列进行合成具有较强特异性的SSR分子标记引物，经过聚合酶链式反应扩增实验需要的DNA片段，获得简单重复序列片段。对实验材料进行聚合酶链式反应，并进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据条带分析其种质资源的遗传多样性。

1。3。2 SSR标记技术的特点