酶的混乱催化将可能是有机化学的潜在合成方法，替代传统的合成，将带来更大的效益 与发展空间，将会得到很多人的关注。为了能在一个绿色环保的系统中进行反应，我们采用 将蛋白酶固定化的方法，并将其与蛋白酶在混乱催化方面进行对比。蛋白酶将使用目前普遍 性较高、选择性低、催化活性高的木瓜蛋白酶，用这两种酶分别催化 knoevenagel 反应，而不 增加任何添加剂就能完成反应。底物选择苯甲醛与乙酰丙酮。因为苯甲醛是最简单，原料最 易得，工业上最常使用的芳香醛。在室温下为无色液体，熔点低，沸点高，能与多种溶剂混 溶，具有低毒性和醛类通性。乙酰丙酮，毒性不高，熔点低，沸点高，与苯甲醛接近，易溶 于多种溶剂，在杂环化合物的合成中有很多用处，常被用作制药的原料及有机合成中间体等， 也是工业上最常用的也是最简单的一类β二酮。溶剂采用水与“万能溶剂”-DMSO。酶催化反 应结束以后，可通过过滤酶使反应停止，用适量水和乙酸乙酯来萃取，最后得到的滤液通过 色谱层析柱来纯化便可得到最终产物。实验中，我们尝试调节不同的反应条件到适宜环境， 来检测固定化后的酶晶体是否能比游离酶表现出更大的优势，在保证绿色环保的条件下，还 能提高蛋白酶的混乱性催化下的产率。