1。6。1 植物总RNA的提取 7

1。6。2 逆转录 8

1。6。3 qRT-PCR分析 9

1。7 数据分析 9

2结果与分析 9

2。1 M1突变体对Cd胁迫的生理响应 9

2。2 NO参与调控番茄耐镉性 11

2。3 NR途径介导的NO合成 13

3小结与讨论 14

3。1 突变体M1对Cd的敏感性增加 14

3。2 突变体M1对 Cd敏感性增加From优T尔K论M文L网wWw.YouERw.com 加QQ75201^8766 依赖于NO 14

3。3 NR参与Cd胁迫下番茄根系NO含量的调控 14

参考文献 16

引言

镉（Cadmium，Cd）是一种具有极强生物毒性的重金属。近年来，由于工业废物排放的增加，含Cd农药的不合理使用等，我国Cd污染日益严重[1-2]。Cd是生物非必需元素，本身具有高毒害性和可移动性，它极易被植物吸收，然后通过食物链进入人体并在体内积累，即微量的Cd就可通过生物放大效应对人体造成骨质疏松等一系列伤害[3-4]。Cd污染已日益成为影响农业生产、环境治理、生态保护以及人体健康的重要因素。因此，Cd对植物的毒害作用及其耐性机理一直是广大学者研究的热点。

番茄(Solanum Lycopersicum M。)是茄科番茄属植物，属一年生或多年生草本，是一种Cd敏感型的作物。番茄在我国普遍栽培，是广受人们喜爱的茄果类蔬菜之一，因此，其重金属安全性引起了人们的广泛关注。同时，番茄作为一种模式植物，具有基因组小，生长周期短等特点，是研究肉质果实生长发育的极佳材料。目前关于番茄的Cd污染研究主要集中在 Cd 对番茄植株生长发育、生理生化的影响及Cd 在植株各器官中的积累等方面[5-8]，也有部分研究关注了不同品系番茄 Cd 积累的特性[9-11]，而有关Cd影响番茄根系生长的分子机制虽也有涉及，但研究报道还不多。

一氧化氮（Nitric Oxide, NO）作为植物体内一种常见的具有水溶性和脂溶性的气体信号分子，其在植物体内的作用一直是国内外生命科学研究的热点问题。目前有关NO在Cd毒害中作用的研究主要集中在外源 NO增强植物Cd胁迫抗性方面[12-13]，内源 NO在植物Cd胁迫下作用的研究虽也有涉及[14]，但内源 NO在番茄Cd胁迫下作用和信号转导的机制尚不明确，有待我们进一步研究。

本研究以本实验室前期发展的番茄镉敏感型突变体M1与野生型（AC）为实验材料，通过研究Cd胁迫下番茄幼苗根系伸长量、Cd积累量、根系一氧化氮（NO）含量等生理指标的差异，初步探讨NO参与调控Cd对番茄根系生长的作用机制，以期为揭示Cd影响番茄根系生长的分子机制提供一定的理论依据。论文网

1材料与方法

1。1试验材料

番茄野生型（AC）、突变体（M1）种子，由杭师大生科院植物RNA信号研究中心提供。

1。2培养方法

1。2。1番茄种子的消毒及发芽培养

挑选籽粒饱满、大小一致的番茄种子若干颗，取10% NaClO（aq）浸置15min；用ddH2O清洗种子3-5次（第一次迅速滤过，后几次每次冲洗5min左右）；清洗后用滤纸吸干水分，将种子播种至含有1/5 Hoagland固体培养基的平板上（以上操作均在生物安全柜中进行）。然后将含有番茄种子的平板密封，转移至人工培养室进行培养。生长环境具体为：温度25℃，相对湿度70%，光照昼夜循环为16h白天/8h夜晚，光照培养（80%）5-7天。