灵芝两阶段发酵研究+文献综述(2)
2.1.1 主要仪器 10
2.1.2 主要试剂 10
2.1.3 培养基 10
2.2 实验内容 10
2.2.1菌丝体培养 10
2.2.2 灵芝菌丝体三萜类化合物的提取及萃取 11
2.2.3菌皮、菌丝体和发酵液95%醇提物的HPLC分析 12
3实验结果与讨论 13
3.1 灵芝的两阶段发酵 13
3.2灵芝菌皮和菌丝体的浓缩与提取 13
3.3灵芝菌丝体醇提物的HPLC分析 13
3.3.1高效液相色谱法 13
3.3.2 20%醇提物核苷混标的HPLC图谱分析 14
3.3.3上层和下层菌丝体中三萜的变化情况 15
3.4 菌丝体醇提物中氯仿部分的分离纯化及化合物结构的测定 16
3.4.1菌丝体醇提物中氯仿部分的分离纯化 16
3.4.2 化合物的结构鉴定 17
4结论 20
致 谢 21
参考文献 22
1 前言
1.1 研究背景
1.1.1食药用真菌
食药用菌俗称“蘑菇”，它由木质、肉质、革质子实体三部分构成，并还具有食用和药用价值的真菌[1]。在中国早就有对食药用菌进行的记载。后来随着科学的进步，人们逐渐加深了对食药用菌的生物学和生产技术的认识。食药用菌主要包括银耳、香菇、灵芝、虫草等。现代研究结果表明它们具有很高的营养价值和药用价值。高蛋白性、低脂肪含量、低能量等特性是食药用真菌重要的营养价值；抗肿瘤作用、降血脂作用、保肝作用、降血糖作用、抗菌作用等体现了其重要的药用价值[1]。
近年来，随着人工栽培技术的成熟和液体发酵技术的发展，食药用菌产业在我国得到迅速的发展，为了解食药用菌的生物活性，我们有必要运用现代的科学技术，对食药用菌进行系统的研究，以发挥其更大的营养和药用价值。
1.1.2灵芝
灵芝属于担子菌门(Basidiomycota)，伞菌纲(Agaricomycetes)，多孔菌目(Polyporales)，灵芝科(Ganodermataceae) [1]，属药用真菌。
灵芝俗称灵芝草、仙草，灵芝在药用方面在我国有悠久的历史。《神农本草经》记载有“赤芝性平，苦，补中，益心气，增智慧，不忘延年” [2] 。《本草纲目》记载灵芝有“益心气，入心充血，助心充脉，益脾气，安神，益肺气，补肝气，治耳聋，坚筋骨，利关节”的功效[3]。这些古籍说明在古代人们就认识到灵芝的药用价值。在2000年，《中华人民共和国药典》收录了两种灵芝：赤芝（Ganoderma licidum(Leyss.ex Fr.) Karst）和紫芝（Ganoderma sinensis Zhao,Xu et Zhang），并规定赤芝和紫芝的子实体均为药用部位，并介绍了灵芝的特性、功能与主治[4]。另外我国国家卫生部公布的可用于保健真菌的名录中，就有赤芝、紫芝和松杉灵芝（Ganoderma tsugae Murr）。
1.2 研究现状
1.2.1 灵芝中的化学成分
目前人们从灵芝的子实体、菌丝体和孢子粉中已经分离出不同种类的化合物，主要有灵芝三萜类化合物、多糖类化合物、核苷类化合物、生物碱类化合物、呋喃类化合物、甾醇类化合物以及多肽类化合物等多种活性物质[5]。查阅文献得知灵芝中的主要的活性成分是多糖类化合物、三萜类化合物、甾醇类化合物。