灵芝两阶段发酵研究+文献综述(6)
另外还有大孔吸附树脂色谱法、高速逆流色谱法等方法。通常情况下，我们是将几种方法结合使用。当待分离物经过多次硅胶柱层析后，然后将较纯的部分使用凝胶柱色谱法、高效液相法等方法进行进一步的纯化，获得高纯度的目标化合物。
1.2.7 灵芝三萜类化合物的药理活性
(1) 抗肿瘤作用
Toth等在灵芝菌丝体的分离纯化中获得灵芝酸U、V、W、X、Y、Z，体外抗肿瘤实验表明其对小鼠肿瘤细胞的增殖有很好的抑制作用。
Wu等发现lucidenic acid N、lucidenic acid A 和灵芝酸E能够明显抑制肝癌细胞 HEPG2和 HEPG2.2.15的增殖。
Yue等发现灵芝酸D能较好的抑制人子宫颈癌细胞Hela的增殖，IC50 值是 17.3 +-0.3μM，同时它能导致细胞凋亡。Liu等证实在灵芝酸S诱导作用下，会导致人子宫颈癌细胞Hela的线粒体介导的凋亡。
Liu等比较了三种不同的孢子(休眠期孢子、发芽期孢子和破壁孢子)的抗肿瘤活性，结果表明后两种孢子的脂溶性提取物能够显著抑制小鼠肝细胞肿瘤、网状细胞肉瘤的增殖。
周昌艳等发现灵芝酸能够明显抑制SW620、LS180、S180三种细胞株的增殖，当灵芝酸浓度达到200μg/ml时对SW620的抑制作用最强， 达到500µg/mL 时对S180的抑制作用最强，而达到1000μg/ml时能够完全抑制LS180的增殖，这说明灵芝酸具有抑制体外肿瘤细胞的增殖作用。黄书铭等用高效液相色谱法发现灵芝醇溶酸性成分是主要以三萜类化合物为主，另外体外抗肿瘤实验和动物实验发现灵芝醇的酸性物质会对肝癌细胞有很好的抑制作用。郑琳等则从灵芝菌丝体分离纯化得到一个三萜，这个三萜对不同的癌细胞都有很好的抑制作用，尤其是对皮肤癌和肝癌细胞。Wang等发现在灵芝酸Me作用下小鼠体内的IL-2和IFN-γ的表达增强了，免疫系统的功能提高了从而显著抑制了肿瘤的生长和转移。
(2) 保肝作用
Hirotani等1987年发现四氯化碳所致的肝损伤小鼠，G. capense中的灵芝酸对其有较好的保护作用，同时能够降低甘油三脂的合成。王明宇等通过乙醇提取、乙酸乙酯萃取从赤芝子实体得到灵芝粗三萜(GT)，将GT通过硅胶柱层析分离到五个组分(GT1—GT5)，通过HPLC分析GT和五个组分都是三萜类成分。然后分别建立了用CCL4(四氯化碳)、D-GAL(氨基半乳糖苷)和BCG+LPS(卡介苗+脂多糖)导致肝损伤的小鼠模型，实验结果表明GT 和 GT2 组分对三种模型的小鼠肝损伤都有很好的保护作用，具体表现在不仅能够减轻肝脏病理损害，还能降低应为肝损伤导致的血清谷丙转氨酶和肝脏甘油三脂的升高，同时发现阳性对照药马洛替酯作用相似。
(3)抗HIV-1作用
El-Mekkaway等通过药理实验发现在赤芝子实体中分离纯化得到的ganoderiol F 和ganodermanontriol可以很好的抑制由HIV-1诱导的细胞MT-4的细胞毒效应，。Sato等发现来自Ganoderma sinense的 GA-GS-2 能够显著抑制HIV-1蛋白酶的活性，IC50值是30μM。
1.3 研究的目的与意义
现在关于液体发酵法生产灵芝菌丝体的研究已有不少报道，而我们的研究已经摸索获得通过两阶段发酵获得高产量灵芝三萜的方法。本研究期望在现有发酵工程技术的基础上，通过多批次的液体发酵及静置培养，获得足够生物量的灵芝菌丝体并提取分离获得足够量的灵芝三萜化合物。
本论文的研究内容对了解灵芝菌丝体中三萜的种类有重要的理论价值，同时对获得的灵芝三萜类化合物，做进一步的灵芝菌丝体的三萜的利用，并开发相关的产品提供了可靠的实验数据。
1.4 研究内容