具体来说，基因定位克隆实验的材料选取突变体sg1与野生型水稻9311杂交，获得的F1群体全为野生型表型。将F1群体进行自交，获得F2分离群体，发现分离群体中野生型与突变体表型个体比例为3:1，说明该突变为隐形突变。接着选取F2子二代群体中的具有突变体表型的单株作为本次基因克隆实验的实验材料。而测定蛋白表达量与激素处理实验的材料由笔者在实验人工气候培养室中种植获得。

1。2  实验方法

1。2。1植物种植条件

 本研究所用的水稻主要种植于中国水稻研究所海南南繁基地来自优Y尔L论W文Q网wWw.YouERw.com 加QQ7520~18766 、中国水稻研究所富阳试验基地以及实验用人工气候室中，其中人工气候室培养条件为：恒温30℃，光照时间及黑暗时间各为12h，光照强度为20000Lux。另外，部分研究用水稻采用水培(营养液配方见表1)的方法培养于人工气候室中。

表1 水稻营养液的配方

名称 药品 含量(g/L)

营养液Ⅰ NH4NO3 91。4

CaCl2 88。6

营养液Ⅱ MgSO4·7H2O 324

营养液Ⅲ K2SO4 71。4

营养液Ⅳ NaH2PO4·2H2O 40。3

营养液Ⅴ Na2EDTA·2H2O 9。315

FeSO4·7H2O 6。965

营养液Ⅵ MnCl2·4H2O 1。5

H3BO3 0。934

(NH4)6·Mo7O24·4H2O 0。074

ZnSO4·7H2O 0。035

CuSO4·5H2O 0。031

注：营养液配置时，需要其pH调至5。5-6。0，并且每隔3天需要更换一次。

 1。2。2 DNA提取论文网

本研究采用的提取水稻基因组DNA的方法是SDS法，提取的步骤如下：

1）剪下水稻叶片 2-3cm（约50-100mg），放入1。5mL的离心管中。写上标记，将离心管中放入液氮中降温，再置于全自动快速碾磨仪中振动，4500rpm1min，即获得叶片粉末；

2）加入DNA 提取液300μL并且混匀，在75℃恒温水浴锅中放置30min，30min内需要每间隔10min振荡混匀一次；

3）加入300μL氯仿并振荡混匀，75℃恒温水浴10min后于12000rpm离心10min；

4）离心之后，将上清液吸取至新的1。5mL离心管中，再加入300μL异丙醇，在4℃温度下静置10min，再将离心机转速调至12000rpm离心10min；

5）第二次离心后，弃上清于废液缸中，再吸取75%的乙醇溶液洗涤DNA沉淀，接着于8500rpm离心5min；

6）第三次离心后，继续弃上清于废液缸中，注意尽量将液体倒干净，再置于通风橱中风干后加入200μL ddH2O溶解DNA，最后于-20℃条件下保存备用；

 1。2。3  分子标记检测

   1。2。3。1  PCR扩增

20μLPCR反应体系如下：

      组分 Component                       体积 Volume（μL）

2×Taq Mix                                     10