1。2。5 植物培养及表型观察 9

2 结果与分析 9

2。1 质粒提取及线性化 9

2。2 体外转录及接种后表型 9

2。3 表型观察与分析 10

3 讨论 11

3。1 研究意义 11

3。2 后续育性的研究 11

参考文献： 12

致谢 13

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拟南芥（Arabidopsis thaliana），属于被子植物门，虽与甘蓝、白菜等植物同属十字花科，但经济价值较低。但其作为生物学最经典的模式植物之一，拥有着许多无法被替代的优点，比如基因组小、生长周期短、生长空间小等等[1]。其价值充分体现在于植物生理学等研究方面，在遗传学以及植物发育等研究中备受青睐。值得一提的是，拟南芥为自花传粉，基因纯合度很高，经各种处理诱导之后，其突变率很高，在基因功能研究方面是不可多得的优良材料。

本氏烟草（Nicotiana benthamiana）是澳大利亚的一种烟草属植物，由于具有易感染性这个特点，广泛应用于植物与病原互作以及植物基因功能研究等方面。值得一提的是，该物种的测序工作已完成，这令本氏烟草作为一种模式植物，将具备更多可供参考的植物基因信息。此外，在病毒诱导基因沉默的实验中，本氏烟草是十分常用的材料[2]。

病毒诱导的基因沉默（virus induced gene silencing，VIGS）是依靠植物感受外源病毒的侵染，启动病毒RNA 介导的转录后基因沉默机制，使植物抵御外来基因侵袭的保护措施。采用 PVX 病毒重组载体，将 GFP 序列亚克隆至 PVX 载体中，通过侵染 GFP 转基因烟草植株 16c 后，绿色荧光蛋白信号被抑制。在 UV 灯下，植物叶片又可见叶绿体自发的红色荧光。利用PVX病毒载体介导的VIGS技术，可以研究目标基因的功能，而由于接种时的植株已近一个月苗龄，因此针对胚胎致死的基因功能研究，尤其具有优势。

核糖体（Ribosome）是存在于细胞中的一种细胞器，它的构成有大小两个亚基 [3,4]。作为细胞内蛋白质合成的场所，它能读取mRNA的核苷酸序列所包含的遗传信息，并将之转化为蛋白质中氨基酸的序列信息以合成蛋白质。核糖体可分两大类，70S与80S核糖体。前者存在于原核原核细胞，后者则存在于真核细胞。核糖体的主要成分是相互缠绕的核糖体RNA（ribosomal RNA，rRNA）和核糖体蛋白质（ribosomal protein，RP）。其中rRNA约占整个核糖体的2/3，而核糖体蛋白仅占1/3 [5]。关于核糖体蛋白的命名，是根据其所在核糖体的大小亚基为依据而命名的，S1到S31为小亚基核糖体蛋白，L1到L44为大亚基核糖体蛋白。由此可见核糖体蛋白L10属于后者。

核糖体蛋白L10是一种普遍存在的蛋白质，属于核糖体蛋白L10e家族成员，其存在于80S核糖体中。其位置，位于核糖体的中央突起和GTP活化中心的深裂中[6]。近年来对核糖体蛋白L10的研究主要集中在RPL10的生物学功能上，各种证据显示RPL10还有除核糖体功能的其他许多功能。Anne Hofer（2007）等人在分析突变的酵母RPL10时发现，突变的RPL10竟无法与核内的核糖体结合[6]。这暗示着RPL10在细胞核中也许还有其他作用。Maria Lorena Ferreyra等人（2010）进行的RPL10蛋白质免疫共沉淀实验，发现RPL10可以在条件不同的两种情况下和不同的蛋白质发生结合，其中包括核蛋白。可见，RPL10至少有一个亚域具备组成核糖体外的生物学功能[7]。