摘   要 我国大豆对进口的过度依赖形势严峻，改善大豆耐盐能力是我们拓展滩涂等盐碱地，并提升本土大豆产量的重要途径。本研究中，我们以大豆作为研究对象，通过基因克隆获得了我们所需要的GmMYB130基因全长序列，过量表达GmMYB130基因，并且构建了RFP荧光载体，同时我们通过农杆菌介导的划线侵染法对大豆进行侵染，结合实验室生根培养技术和体式荧光显微镜技术筛选出阳性大豆根，从而为下一步研究大豆耐盐响应过程中的关键调控基因GmMYB130的作用机制奠定基础。90348

毕业论文关键词：大豆； GmMYB130； 耐盐基因； 过量表达； 载体构建； 基因克隆

Abstract Our national soybean supply is seriously depended on imports。 Hence, it’s our duty to develop some salt-tolerant cultivars suitable for planting in saline-alkali land and enhance our national soybean production。 In this study, the full sequence of soybean salt responsive gene GmMYB130 was cloned and inserted into pDL28-RFP vector。 Then, the pDL28-35S::GmMYB130/Ubq10::RFP construct was transformed into soybean root via Agrobacterium rhizogenes strain K599。 The GmMYB130 overexpressed transgenic roots were screened by fluorescent stereo microscope。 This research provides important materials for further mechanism study of the GmMYB130’s function。

  Key words: Soybean; GmMYB130; Salt tolerance gene; Overexpression; Vector construction; Gene cloning

目录

引言 4

1． 材料、仪器设备及试剂 6

1。1 实验材料 6

1。2 实验试剂 6

1。3 仪器设备 6

1。4 培养基 6

1。5 PCR扩增引物 6

2． 实验方法 7

2。1 大豆植株总RNA的提取（Trizol法） 7

2。2 cDNA模版的合成 8

2。3 PCR扩增目的基因 9

2。4 T载体克隆PCR获取的目的基因 9

2。5 T-GmMYB130转化到大肠杆菌 10

2。6 pDL28-HA-GmMYB130-RFP载体构建 10

2。7 表达载体转化至K599发根农杆菌 11

2。8 农杆菌侵染大豆 11

2。9 用体式荧光显微镜筛选转基因阳性根 11

3． 结果与分析 11

3。1 大豆GmMYB130 PCR产物 11

3。2 大豆pDL28-HA-GmMYB130-RFP酶切产物 12

3。3 萌发大豆生根 12

3。4 转基因阳性根的筛选 13

4． 讨论 14

参考文献： 15

致谢 16

引言

1、 研究背景源Q于W优E尔A论S文R网wwW.yOueRw.com 原文+QQ75201,8766

大豆不但是畜牧业蛋白饲料的主要来源，而且也是重要的粮食作物，还是重要的油料作物[1]。由于大豆的营养价值较高，故有了“田中之肉”、“绿色牛乳”、“豆中之王”的美称，大豆已经成为数百种天然食物中最受人们推崇的食物[2]。我国已有五千年种植大豆的历史，大豆在我国农业生产以及社会经济生活中都占有重要的地位[3]，在我国华北、东北、川、陕及长江下游地区均有大豆种植，尤其在长江流域及西南出产较多，以东北大豆品种最佳。因此中国也成为了大豆生产大国和出口大国，曾在世界贸易体系中有着举足轻重的地位。从二十世纪五十年代开始，美国大豆生产迅速崛起，成为世界第一大豆生产国 ，栽培的面积与总产量均超过我国。而中国则由大豆出口大国变成了大豆进口大国。根据我国海关部门统计的数据显示，2016年中国大豆进口总量超过8300万吨，较2015年进口量增加222万吨，增幅为2。7%，大豆进口总量再创新高，远远超过了国内大豆1300万吨的生产量。而进口大豆尤其是转基因大豆的大量进口，不仅严重威胁到占农业人口4。66%的大豆生产者的根本利益，还严重冲击我国国家农业生产安全。反观我国大豆供不应求的根本原因，除了日益上升的国内大豆需求外，最主要是由于我国的土壤盐渍化[4]分布广、面积大的特点，造成了国内大豆生产量低下。如果将其他肥沃的耕地用于种植大豆，无异于拆东墙补西墙。据不完全统计，全球约有9。5亿hm被盐渍化的土壤，占全球总土地面积的10%，这其中有近7700万hm是次生盐渍化土壤。在我国耕地面积有近3460万hm，但发生盐渍化的土壤居然约有760万hm，近1/5的耕地被盐渍化。如果可以拓展滩涂盐碱地用于提高大豆种植面积，这必然是一个具有前景且建设性的产业。