摘   要 本研究以提高大豆在滩涂地等盐碱地的耐盐能力为目的，探索了耐盐基因GmPE80在大豆根部的过量表达。本研究中，我们从新鲜的Union85140盐敏感大豆根中提取总RNA，反转录为cDNA，经过PCR扩增获得目的基因片段，构建表达载体pDL28-35S::GmPE80 /Ubq10::RFP，随后转化至发根农杆菌k599中，侵染大豆叶节获的转基因根。最后，结合实验室生根培养技术和利用体式荧光显微镜技术筛选出阳性大豆根。本实验的研究可为后续剖析基因GmPE80提高大豆耐盐响应的分子机制做铺垫。90276

Abstract The purpose of this study was to improve the salt tolerance of soybean in saline alkali soil。 We explored the over expression of salt tolerant gene GmPE80 in soybean roots。 Firstly, the total RNA was isolated from the fresh roots of Union85140 soybean seedlings。 Then, the cDNA was gained by reverse transcription。 Thirdly, the target gene was amplified by high-fidelity PCR and inserted into the pDL28-RFP vector。 After that, the pDL28-35S::GmPE80/Ubq10::RFP construct was transformed into soybean root via Agrobacterium rhizogenes strain K599。 Finally, the transgenic roots were selected by fluorescence microscope as well as rooting culture in laboratory。 This study will provide important material for further understand the molecular mechanism of GmPE80 on enhancing soybean’s tolerance to salinity。

毕业论文关键词：大豆根；发根农杆菌k599；GmPE80；耐盐基因；过量表达源Q于W优E尔A论S文R网wwW.yOueRw.com 原文+QQ75201,8766

Key words: Soybean root; Agrobacterium rhizogenes strain K599; GmPE80; Salt tolerant gene; Overexpression

目  录

引言 4

一 材料与试剂 5

1。1 植物材料 5

    1。2 菌种质粒材料 6

    1。3 分子生物学试剂 6

二 研究方法 6

    2。1 基因GmPE80的克隆 6

    2。1。1 大豆总RNA的提取 6

2。1。2 cDNA反转录 7

2。1。3 目的基因的克隆 7

        2。1。4 回收目的基因DNA片段 8

2。1。5 GmPE80-T vector载体连接和转化 8   

2。1。6 质粒DNA的提取 9

    2。2 含基因GmPE80真核表达载体构建 10

2。2。1 过表达载体构建 10

2。2。2 农杆菌K599转化10

    2。3 大豆毛状根转化11

三 结果与分析。11

    3。1 基因GmPE80的克隆11

    3。2 含基因GmPE80的真核表达载体构建12   

3。3 转入PDL28-HA-OEGmPE80-RFP真核过表达载体的阳性根筛选 13

四 讨论 13

参考文献 15

致谢 16

引言来自优Y尔L论W文Q网wWw.YouERw.com 加QQ7520~18766

大豆(Glycine max L。)原产于本国，已有五千年栽培历史。众所周知，大豆具有营养和保健的双重功效，是一种不可多得的平衡膳食资源。但是随着国民生活水平的逐渐提高，本国对大豆的需求量日益增加，可见大豆产业的重要性和紧迫性日益剧增[1]，然而本土供应大豆的能力却尚显不足。近年来，本国农户种植大豆积极性持续降低，大豆种植收益不断下降，这是由于国产大豆自身品质还有待提高以及许多加工企业过度依赖进口大豆等原因[1]，从而对国产大豆的市场形势造成极大地冲击。