外源GSH缓解多花黑麦草镉毒害初探(3)
Hoagland营养液: KNO3 1M、Ca（NO3）•4H2O 1 M、NH4H2PO4 1 M、MgSO4•7H2O 0.2 M，微量元素母液 2 mL：KCl 25 mM、H3BO3 12.5 mM、MnSO4•H2O 1 mM、ZnSO4•7H2O 0.8 mM、Na2MoO4 0.3 mM、CuSO4•5H2O 0.25 mM，铁盐溶液：FeSO4•7H2O 20 mM、EDTA•2Na 20 mM。
1.2 样品Cd含量测定
取处理后第10天的苗，根系用20 mM的EDTA-Na溶液浸泡20min后，用去离子水清洗干净，分为根和地上部分，每个处理各取三个重复，每个重复取两株苗，置于自封袋中，然后放入烘箱中烘干。取出，绞碎，称取0.1g样品加入5mL硝酸/高氯酸（85:15）中消煮，再用2.5%硝酸定容至10ml。用电感耦合等离子体质谱法（ICP-OES）法测定Cd浓度。
组织积累量=生物量×组织Cd的含量。
1.3 生理指标测定
1.3.1 过氧化氢含量测定
过氧化氢含量测定参照Li P et al.（2012）的方法。取0.5 g样品根，用3毫升的0.1%的TCA提取，于研钵中研磨成匀浆，转移至10毫升离心管中，12000 g，4℃离心20分钟，取上清液0.5毫升，转移至5毫升离心管中，加入0.5毫升的10 mM的PBS溶液（PH=7.0），再加入1毫升1 M的KI溶液，反应10-15分钟，在390 nm处测定吸光值，根据标准曲线计算其浓度。
1.3.2 叶绿素含量测定
取10 ml离心管，装入10 ml无水乙醇，待测植物叶片样品去0.15 g，剪成细丝，置于无水乙醇中，避光保存，直至植物样品完全变白。
在1 cm比色皿中，注入叶绿素提取液(浓度大时需稀释)。另以叶绿素提取介质作为参比溶液注入1 cm比色皿中。根据实验要求，选用相应的波长(测胡萝卜素用470nm，测叶绿素a、b含量及总量选用665 nm和649 nm)，在分光光度计上测定光密度。将测定的光密度值代入下列公式可求出比色皿中的叶绿素含量。在计算样品中叶绿素的含量时，需要考虑稀释倍数。样品中叶绿素含量(mg Chl/g鲜重或mg Chl/ml叶绿体)D=比色杯中叶绿素含量×稀释倍数/样品量(g鲜重或ml叶绿体)
光合色含量(mg/L)=叶绿素a含量与叶绿素b含量的总和
叶绿素a含量(mg/L)=12.7D665-2.69D649
叶绿素b含量(mg/L)=22.9D649-4.68D665
类胡萝卜含量(mg/L)=(1000 D470-2.05叶绿素a含量-114.8叶绿素b含量)/245
1.4 生理指标组织化学染色实验
1.4.1 过氧化氢组织化学染色实验
过氧化氢组织化学染色实验参照Hasan M K et al.（2016）方法，略有改动，取处理36小时的苗1-2株，置于DAB染色液中15分钟左右，用水冲洗，用 FAA(50%酒精：冰醋酸：甲醛=18:1:1)保存，在体式显微镜下观察拍照。
1.4.2 超氧阴离子组织化学染色实验
超氧阴离子组织化学染色实验参照Chen F et al.（2010)的方法，有所修改；取处理48小时的苗1-2株，置于NBT染色液中浸泡20分钟左右，用水冲洗后，放置在FAA(50%酒精：冰醋酸：甲醛=18:1:1)中保存，在体式显微镜下观察拍照。
1.4.3 Evans Blue组织化学染色实验
取处理24小时的苗1-2株，置于Evans Blue染色液（0.25%(w/v)）中10-15分钟，用水冲洗后，放置在FAA(50%酒精：冰醋酸：甲醛=18:1:1)中保存，在体式显微镜下观察拍照。
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