溶液,3 min后测 OD595吸光度。可溶性蛋白质含量(mg/g)=(C×VT)/(W×VS×1000).C
是标准曲线查得的蛋白质含量(μg) ;VT为提取液总体积(稀释后的体积 ml) ;VS为测
定时所用提取液体积(ml,20 μl) ;W为样品鲜重(g) 。 1.2.4 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定
酶液制备:取 0.2 g 叶片或根,用蒸馏水洗净,再用吸水纸将水分吸干,然后置于
早已在冰上预冷的研钵中,加入 1.6 ml 50 mmol/L预冷的磷酸缓冲液,在冰上研磨成匀
浆,将匀浆导入离心管中,在4 ℃、12000 g 条件下离心 20 min,所得上清液即为酶液。
酶活性测定: (1)反应混合液配制:分别取 Met 溶液 162 ml,EDTA-Na2 溶液 0.6 ml,
磷酸缓冲液5.4 ml,NBT溶液6 ml,核黄素溶液6 ml,混合后摇匀; (2)把30 μl 的酶液
加入的到试管中,在向其中加入3 ml 反应液(3)光照反应 20 min,光强为 4000 lux,
然后在避光条件下测定 OD560
酶活性计算: 
SOD总活性= [( Ack-AE )×V]/(1/2Ack×W×Vt)
SOD比活力=SOD 总活性/蛋白质含量
SOD总活性单位为(u/g FW) ;比活力单位以酶单位每毫克蛋白表示;Ack 为对照
管的吸光度;AE为样品管的吸光度;V为样液总体积(ml,1.6 ml,加入 PBS 的体积);
Vt 为测定时的酶液用量(ml,30 ul) ;W 为样品鲜重(g, ) ;蛋白质含量单位为 mg/g。 
1.2.5 过氧化物酶(POD)活性测定
参照Rao[5]
的方法
1.2.6 过氧化氢酶(CAT)活性测定
参照Rao[5]
的方法
1.2.7 抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性的测定(缓冲液为 K) 
酶活性的测定(以 2 ml 体系测定) :
取0.10 ml 酶液, 加入1.7ml 含0.1 mM EDTA-Na2的PBS (PBS为0.05 mol/L, pH7.0) ,
再向其中加入 0.1 ml 5 mM 的 AsA,最后加入 0.1 ml 20 mM H2O2,立即在20 ℃下测定
OD290值在40 s 内的变化
计算公式:
ᇞOD/ᇞt×Vr×VT 
A×d×Vt×W
ᇞOD为反应时间内吸光度的变化; ᇞt为反应时间, 为40 s; Vr为反应液体积为2 mL;
VT提取液体积, 为 1.6 mL; A为消光系数, 为 2.8 mM-1
.cm-1
; d 为比色杯厚度, 为 1 cm;
Vt 测定液体积,为 0.1 mL;W为样品鲜重,为 0.2 g。
1.2.8  丙二醛(MDA)含量测定
首先先将研钵冰浴, 再向研钵中加入5 ml 10% 三氯乙酸研磨,  4000 ×g离心 10 min,
上清液为样品提取液,吸上清 2 ml(对照加 2 ml 蒸馏水) ,加入 2 ml 0.6% TBA(用10%
mM TCA  配置) , 混匀物置于水浴反应15 min, 迅速冷却后再离心。 离心后取其上清液,
分别测定 532、600、450 nm波长光密度。MDA=6.45(D532-D600)-0.56D450 
1.2.9 H2O2 含量的测定
采用 Velikova(2000)方法,称取一定量的鲜样,加入5 ml 0.1%(W/V)TCA冰
浴研磨, 12000×g离心15 min, 上清液供测试。 取0.5 ml 提取液, 加入0.5 ml 10 mM pH7.0
PBS,1.0 ml KI,摇匀。将溶液置于390 nm 波长下比色测定。同样程序制作标准曲线。 
1.2.10 镉含量的测定
分别称取0.1 g 地上部和地下部干样,于2 ml HNO3+8 ml H2O的体系中进行微波消
解 35 min,随后用去离子水将消解液定容至25 ml 备用。用 5% HNO3 配制 Cd 的标准液
于 ICP-MS(Optima 2100DV, PerkinElmer Waltham, MA, USA)下测定镉含量。
1.3  数据分析与处理方
实验数据用 Excel 表格建立数据库,分析用 SPSS 6.0 中邓肯多差距实验中的
one-way ANOVA 的方法分析不同处理间的差异,其显著性在P<0.05 水平上。用 Graph Prism v5.0 进行作图。
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