图4 胶原蛋白结构示意图

多肽的吸收主要是通过特殊的肽运转系统，肽载体1 型( PepT-1) 和肽载体2 型( PepT-2) 都是肽转运的主要载体，其中肠肽转运载体是PepT-1，肾脏肽转运载体是PepT-2。PepT-1可以转运二肽到五肽，转运速度最快的是二肽，五肽以上不能运转，所以分子量对于多肽吸收率很关键。口服的多肽被吸收前还会经过胃液的消化以及小肠上部的肠道酶的降解形成分子量更低的多肽；所以，探究分子量的范围对于口服多肽吸收率的影响很有意义[22]。论文网

国内外已经有很多学者对鱼鳞中胶原蛋白的提取进行了广泛的研究。现有的鱼鳞中胶原蛋白的提取方法主要有酸提取法和酶提取法[23、24、25]。酶提取法虽然回收率较高、反应过程无污染，但是酶解过程中胶原蛋白的非螺旋区域被蛋白酶分解，胶原蛋白的稳定性和耐热性降低，所以酶法提取的热稳定性不及酸法提取[2]。酸法提取工艺中，酸度的提高有利于胶原蛋白的提取，但是酸度过高会增大胶原蛋白的溶解速度，并使核酸大量从样品中溢出，反而会使胶原蛋白提取率下降，所以选取适当的酸浓度对于胶原蛋白酸提取法至关重要[26、27]。

关于提取方法，已有的对鱼鳞中胶原蛋白提取的研究，实验设计多是采用正交试验。正交试验虽然能够解决全面试验中因素过多的问题，但是试验次数仍然太多，工作量大，对于费用高的试验来说成本太高[28]。对于多水平、多因素的试验，“均匀分散”的均匀设计法更加适用。

正交设计为了达到“整齐可比性”，必须对任意两因素采取全面试验，每个因素的个水平需要重复，这样可以使试验点在其规定范围内均匀分散；试验点需要足够多才能达到“整齐可比性”。均匀设计法不用考虑正交试验的“整齐可比”，大大减少了试验点数和试验次数，每个因素的每个水平只进行一次试验，试验次数随着水平数的改变而改变，不仅节约了时间，也节省了试验成本[29]。

    本文采用提取鸟嘌呤后的鱼鳞残渣作为原料，盐酸作为溶剂，运用超声辅助均匀设计法提取鱼鳞中胶原蛋白，根据GB/T695。23-2008用分光光度计分析提取物中羟脯氨酸的含量[30]，并通过回归分析探索出最佳提取方案。使用超滤、调节等电点等方法分离鱼鳞中的活性成分，最后使用红外光谱表征。这一提取方法将为鱼鳞中胶原蛋白的开发和应用提供有价值的参考依据。超声辅助均匀设计在鱼鳞胶原蛋白提取方面的应用目前未见报道。

3。2材料、仪器与试剂

材料：原鱼鳞和2。3中提取后的鱼鳞。

预处理：将鱼鳞用水洗净和2。3中提取鸟嘌呤后的鱼鳞渣，冷冻干燥后用摇摆粉碎机机搅碎，在冰箱中储藏备用。

仪器：旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)、超声波提取机（功率：1000W，变幅杆：ф6mm，电压Ac>20V）、UV1902PC紫外/可见分光光度计（上海凤凰光学科仪有限公司）；SK2210HF超声波清洗器； SHZ-D(III)循环水式多用真空泵（巩义市科瑞仪器有限公司）；LGJ-18S冷冻干燥机；傅立叶变换红外光谱仪: Nicolet 5700 型（美国热电尼高力公司）、美的

BL1OS11搅拌机（破壁料理机）、电热鼓风干燥箱（上海博讯实业有限公司）、TGL-16D台式高速离心机（常州海龙实验仪器有限公司）、DFT-500摇摆式高速万能粉碎机（温岭市林大机械有限公司）、数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）、超滤杯（北京卓尔恒信科技有限公司）。文献综述

试剂：硫酸、盐酸、氢氧化钠均为分析纯；氯胺T为分析纯，购置于上海展云化工有限公司；正丙醇为化学纯，购置于上海化学试剂站中心化工厂；对二甲氨基苯甲醛和L-羟基脯氨酸均为分析纯，购置于上海晶纯生化科技股份有限公司；一水合柠檬酸为分析纯，购置于上海沪试化工有限公司；无水乙酸钠为分析纯，购置于天津市恒兴化学制造有限公司；高氯酸为分析纯，购置于上海联茂化工厂。