摘要：用海藻酸钙包埋法对具有羰基还原酶的酵母细胞进行固定化，并用于催化(4-氯苯基)(吡啶-2-基)甲酮(CPMK)不对称还原反应，考察了固定化时所用的菌量、海藻酸钠浓度、氯化钙浓度、有机溶剂种类等因素对反应产物(S)-(4-氯苯基)(吡啶-2-基)甲醇即(S)-CPMA的影响。结果表明，固定化时应采用菌量0。1g，海藻酸钠浓度3%，氯化钙浓度4%时较佳。此外，反应优化条件时增加二甲亚砜、四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、正庚烷、PBS缓冲液、正己烷以及异丙醇等有机溶剂的研究，其中4%的二甲亚砜条件最优。91665

毕业论文关键词：海藻酸钙，羰基还原酶，CPMK，不对称还原，优化，(S)-CPMA

Abstract：Yeast cells with carbonyl reductase was immobilized in sodium alginate, and used in the asymmetry reaction of catalytic reduction of CPMK。 Investigating the influences of concentration of bacteria, the sodium alginate concentration, calcium chloride concentration, organic solvent in immobilization on the production of (S) –CPMA。 It showed that in immobilization the amount of bacteria should be used at 0。1g, and  sodium  alginate concentration at 3%, calcium chloride concentration at 4%。 In addition,  the reaction optimization conditions increased some kinds of organic solvents researches。 Such as dimethyl sulfoxide, tetrahydrofuran, ethyl acetate, methanol, n-heptane, PBS buffer, n-hexane and isopropanol, in which 4% dimethyl sulfoxide conditions are the best。

Keywords：Calcium alginate, carbonyl reductase, CPMK, Asymmetric reduction, optimization, (S)-CPMA

目录

引言 4

1材料与方法 5

1。1材料 5

1。1。1菌种 5

1。1。2试剂 5

1。1。3主要仪器设备 5

1。1。4主要培养基（g/L） 5

1。2实验方法 5

1。2。1酵母的培养方法 5

1。2。2酵母细胞的固定化 5

1。2。3转化的具体方法 5

1。2。3HPLC检测分析方法 6

1。2。4反应产物e。e。值和剩余底物的计算 6

2结果与讨论 6

2。1菌量对羰基还原反应的影响 6

2。2海藻酸钠浓度对羰基还原反应的影响 7

2。3CaCl2浓度对羰基还原反应的影响 8

2。4不同添加剂对羰基还原反应的影响 9

2。5二甲亚砜浓度对羰基还原反应的影响 9

结语 11

参考文献 12

致谢 13

引言源G于J优L尔V论N文M网WwW.youeRw.com 原文+QQ75201`8766

近年来，人们在羰基还原酶的分离纯化、蛋白测序及序列分析等方面进行了大量的工作，并且发表了越来越多的微生物基因组全长序列，使得从基因数据库中发现和筛选具有优良催化特性的羰基还原酶变得更加容易，基因工程菌株能有效地催化手性醇也成为新的研究方向领域的重要合成技术[1]。

而细胞固定化技术，是利用物理或化学方法在密闭空间中找到游离微生物（细胞）或酶，并使它们能够保持活性和可重复使用的技术。包埋法是近年来发展迅速的一种新兴细胞固定化技术，具有操作简单，对细胞活性影响较小，效率高等特点，是目前细胞固定化研究和应用最广泛的方法[2]。固定化较高密度的微生物细胞可以提高生物反应器的产率，它比游离细胞相比，优点有以下几点：(1)固定化小球可以回收再利用，能够减少成本。(2)一定程度上能增强固定化制剂操作性能的稳定性，使得在水凝胶基质中被固定的微生物细胞可以抵御如毒性、有机溶剂等其他剧烈环境的影响，提高其对温度、pH的适应性[3]。(3)由于固定化细胞比游离细胞体系具有更高的转化率，可以在生物反应器中连续操作，即使是在溶液流速很快的情况下也不会轻易被洗脱掉，所以可以采用连续操作工艺，反复使用固定化细胞，提高了反应器的产率，使固定化制剂的使用率也提高，从而也达到降低生产成本的目的。