3。4。1。2 LB培养基中细菌RNA的提取
将APEC E1株在LB培养基中静置过夜培养后按上述RNAiso plus试剂盒法提RNA。
3。5 RNA质量检查
提取出的RNA每管分别取1μL ,用核酸微量检测仪测OD 260和 OD 280,RNA样品的OD 260/280应在1。7-2。1之间。
3。6 RNA电泳检查文献综述
琼脂糖凝胶的制备:天平称取琼脂糖0。3g,放入150mL三角烧瓶中,加入30ml 1×TAE溶液,轻轻摇匀,然后置于微波炉中加热融化,加热1-2min至沸腾,从微波炉中取出,摇匀,直至肉眼观察无凝絮状悬浮物。冷却至约60℃,加入0。5ml Goidview染料,摇匀,倒入制胶器中,插入梳子。室温放置约30min后即可使用。待琼脂糖凝胶凝固后将梳子拔出,顺着胶板轻轻将凝胶推入电泳槽中保存。
从提取的RNA中取0。5μg 样品加入0。2mL的指型管中,用超纯水补至8L,加入2μL 5 × loading buffer混匀。在70℃水浴锅中加热10min使其变性,然后置于冰上1min,加入 1μL EB溶液,离心后在凝胶上样,进行电泳。电泳条件为:电压120V,电流80mA,时间35min。电泳结束后,将凝胶置于凝胶成像仪照像。RNA质量判定标准(原核生物):有清晰的23S、16S条带,无降解,且肉眼观察23S条带亮度约是16S的1-2倍。