摘 要：本实验成功分离培养了大鼠骨髓间充质干细胞和大鼠心肌细胞。通过低氧共培养后进行酶标仪及流式细胞仪检测并对结果进行了分析，结果显示随着BMSCs数量的增加，低氧培养的心肌细胞的细胞活力增加以及细胞凋亡减少。93566

毕业论文关键词：间充质干细胞，大鼠心肌细胞，细胞活力，凋亡

Abstract： In this experiment, Mesenchymal stem cells and Rat myocardial cells were isolated and cultured successfully。 Then they were detected by Microplate Reader and Flow Cytometry, and the results were analyzed。 The results show that with the increase in the number of BMSCs, the cell viability of hypoxia in cultured myocardial cells increased and the apoptosis number of cultured myocardial cells reduced。

Keywords: Mesenchymal stem cell, Rat myocardial cell, cell viability, apoptosis

目   录

1  前言 4

2  实验材料 5

2。1  细胞 5

2。2实验试剂 5

2。3实验仪器 5

3  实验方法 5

3。1大鼠BMSCs的分离和培养 5

3。2大鼠CMs的分离与培养 6

3。3大鼠CMs与BMSCs的共培养 7

3。4 CCK8法检测细胞活力 7

3。5 Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡 7

4  实验结果 7

4。1  分离培养的BMSCs 7

4。2  分离培养的心肌细胞 8

4。3 CCK8法检测细胞活力 9

4。4 流式细胞仪结果分析 9

结  论 11

参考文献 12

致  谢 13

1  前言来自优I尔Q论T文D网WWw.YoueRw.com 加QQ7520~18766

 间充质干细胞是来自于中胚层的一种成体干细胞，其广泛存在于结缔组织和器官间质中，尤以骨髓组织中含量最多。间充质干细胞在体外培养时通常呈纺锤形或梭形的细胞形态，易黏附于塑料培养皿表面，因此过去被称为塑料贴壁细胞。由于间充质干细胞具有多项分化的潜能并且易获取、扩增能力强、遗传稳定性免疫原性低、无伦理问题等优点，因而在再生医学方面具有广阔的研究应用前景，是组织工程的种子细胞[1]。

骨髓是获取间充质干细胞的重要来源，从中提取出的间充质干细胞称为骨髓间充质干细胞（BMSCs）。其存在于骨髓中的非造血组织中，增殖能力强且传代质量高，由骨髓组织干细胞或前提细胞和躯体组织干细胞组成。骨髓间充质干胞在未分化状态下细胞形态为纺锤形，类似于成纤维细胞。在适当环境下，骨髓间充质干细胞经过诱导可分化为中胚层的组织细胞，如：骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞、血管内皮细胞等。[2]近年来发现了骨髓间充质干细胞的可塑性，即能跨胚层分化为外胚层的神经细胞；内胚层的肝细胞等[3, 4]。

心肌细胞是心脏的基本构成单位，占心脏构成细胞的25%，其余是由成纤维细胞、内皮细胞、血红细胞等18种非心肌细胞构成[5]。

心肌细胞是一种典型的生物学实验工具，是其他心肌细胞不可替代的功能细胞。90多年前Burrous对移出的鸡胚心脏组织块进行培养, 并观察到单个的个体细胞发生迁移；1953 年Burrous首次成功地应用生物酶分离出鸡胚心肌细胞后。直到1976 年, 才出现一种有效的分离活的成熟心室肌细胞的方法, 并于1977年, 首次培养了成熟心肌细胞。此后生物酶分离培养技术不断发展, 逐渐发展为3 种分离方法:离体心脏灌注法（质量及数量最佳）、心肌细胞浸泡法和贴块培养法。1998 年12 月, 我国成功建立了成年大鼠心肌细胞分离培养方法并进行了形态学观察[5, 6]。