2。2。7 染色

染色剂多为水溶液，故染色前先配置好染色液。以H。E。染色法而言有下列步骤：

配制苏木精和曙红染色液：

(1)苏木精染液：苏木精是一种碱性染料，它可将染色质染成蓝紫色。配方有多种，现介绍Harris氏苏木精[6]的配制：     

甲液：    苏木精                      0。5g 

 95％酒精               　　　  5。0 ml 

乙液：    硫酸铝钾（或硫酸铝铵）            1g     

蒸馏水                   　   100ml     

氧化汞                   　   0。25g     

冰醋酸                   　　 几滴　 

先将甲液溶解，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水中，并加热使溶解，然后将两液混合煮沸，离开火焰后缓缓加入氧化汞。冷却后过滤，加入几滴冰醋酸即成。 

(2)0。5％曙红酒精溶液：即0。5g曙红溶于100ml95％酒精中。 曙红是一种酸性染料，它可使多种细胞的细胞质染成粉红色或红色。

染色的步骤包括：论文网

⑴、脱蜡：将烤干的切片放入二甲苯中1h，并将其放入50℃恒温箱中， 以溶去切片上的石蜡。

⑵、复水：是将脱蜡后的切片经各级浓度酒精逐渐下降到水的过程，即将二甲苯中取出的切片移入无水酒精（I）→无水酒精（II）→95％酒精（I）→95％酒精（II）→80％酒精→70％酒精→50%酒精→30%酒精→蒸馏水，各级中停留3min。 

⑶、染色：

①、将蒸馏水洗涤后的切片移入苏木精染色液中5－10min，使细胞核着色。

②、用自来水洗去切片上残余的染液。

③、用1％盐酸酒精分色数3min。分色时就是褪去细胞质不应着色部分的颜色，而使细胞核着色得清晰适度。分色时需随时用显微镜检查切片，使分色适度。         

④、放入自来水中20min左右，使之蓝化，因为自来水的碱性较弱，所以时间需较长。 

⑤、在蒸馏水中浸片刻。 

⑥、切片入30％酒精→50％酒精→70％酒精 →80%酒精→95%酒精（I）各3min。 

⑦、入曙红酒精溶液中染色15s，使细胞质着色。

（4）脱水：切片依次入95％酒精(Ⅱ)→无水酒精(Ⅰ)→无水酒精(Ⅱ)，各级中停留3min。

（5）透明：切片入二甲苯（Ⅱ）中停留3min。

2。2。8 封片

将切片从二甲苯(Ⅱ)中取出，用纸或布擦去材料周围的二甲苯。在材料中央滴一小滴树胶，然后，用镊子加盖盖玻片，使其与二甲苯充分混合，若有气泡产生，用小镊子或针头把气泡赶出，否则影响观察。

2。2。9 烤片

切片封好后，放在切片托盘上待干燥，将盛有切片的托盘放入烘箱中24h烘干后即可观察。 

3。实验注意事项文献综述

采集样品时，所采集的样品大小要均等，不能过大。采集完后要立即放入固定液中固定，固定的时间也不宜过长，否则组织过硬难以切片[4]。脱水和透明是实验中的关键步骤。脱水透明过长时，会破坏组织的柔软度，使组织过硬难以切片[7]；脱水透明过短时，组织脱水不彻底，组织浸蜡不完全，导致包埋凝固后组织周围出现空隙难以切片。组织透明的时间可根据组织的颜色变化来决定，一般来说，组织呈现棕黄色或棕色即可。在进行浸蜡时，必需要把蜡液中的沉过滤掉，否则会影响浸蜡效果[8]。在进行包埋时，技术要求过高，必须要在熔蜡箱中迅速将组织垂直放在小酒盅的底部中央。为了防止蜡凝固后不易与小酒盅分离，在包埋前可以在小酒盅壁上涂抹适量甘油。在切片前应先将蜡块修整成与小木块大小相似的正方形，修整的蜡块厚度不宜过薄，否则切片时容易与小木块发生脱落。在贴片过程中，载玻片要清洗彻底，否则会掉片，出现组织块周围区域有被红染现象[9]。实验中要注意安全。