在饲料中添加木聚糖酶，一定程度上扩大了饲料的使用来源，相应的就节省了在饲料这一方面的开支，并且改善了禽畜的健康状况，在一定程度上缓解了资源短缺的困境[16]。

1。5研究的目的及意义

里氏木霉在工业化规模的酶生产中的安全实施已有很长的历史。它生产的纤维素酶和木聚糖酶被应用在食品、动物词料、药品、纺织品和纸浆造纸业。

里氏木霉的次级代谢物中有毒的代谢产物产生具有菌株特异性和环境依赖性[17]。它一般被认为是可以安全生产内源酶的微生物,对于其他无害的基因产物也是一个安全的宿主[18]。

到目前为止, 随着对生物可再生资源的研究与开发，越来越多有关木聚糖酶基因的研究被报道，木聚糖酶的商业价值也逐渐被挖掘出来。虽然在自然界中木聚糖酶的含量极其丰富，但是它却很难在天然材料中表达出来，通过分离纯化的手段方法肯定增加工业生产的成本，不符合经济效益，很难投入大规模生产。国内外的很多学者致力于利用基因工程技术在分子水平上对木聚糖酶基因进行改造，以求能够解决这一问题。

本研究从实验室中保藏的里氏木霉中克隆得到木聚糖酶基因，并将其与载体连接，导入到大肠杆菌受体细胞中进行保种，便于后续对木聚糖酶进行更为深入的研究。

2材料与方法

2。1材料

2。1。1菌种和载体

研究所用的菌种为淮阴师范学院生命科学学院保留的里氏木霉菌种，大肠杆菌感受态DH5 和pUC-T Simple载体均购买自康为世纪生物工程有限公司。

2。1。2主要仪器及设备

2S-75HJ型高压灭菌锅：江阴滨江医疗设备有限公司

SW-CJ-IFD型单人单面净化工作台：苏州净化设备有限公司

SPX-250B生化培养箱：上海佳胜实验设备有限公司

HD-930型组合式全温摇床：太仓市博莱特实验仪器厂，

电子天平FA2004B：北京赛多利斯天平有限公司

HD-930DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱：上海精宏实验设备有限公司

DYY-10C型凝胶电泳仪器：北京市六一仪器厂

PCR仪:eppendorf公司

雷磁pHS数显pH计:上海精密科学仪器有限公司

ZF1-Ⅰ多功能紫外分析仪：上海汗诺仪器有限公司

Universal HoodⅡ凝胶成像仪 ：Bio-Rad

HH-S恒温水浴锅：金坛市亿通电子有限公司

EPED-E2-10TF纯水仪：南京易普易达科技发展有限公司

SH2-Ⅲ型循环水真空泵：上海亚荣生化仪器厂

WH-3微型漩涡混合仪：上海泸西分析仪器厂有限公司

FM-50型雪花制冰机：上海比郎仪器有限公司

2。1。3酶和主要试剂论文网

限制性内切酶Kpn I、NotⅠ和T4 DNA Ligase购自纽英伦生物技术（北京）有限公司

DNA Marker DL2004D、超纯RNA提取试剂盒（DnaseI）和 pUC-T SimpleTA快速连接试剂盒（含载体，连接酶）购自康为世纪有限公司，质粒小量制备试剂盒（离心柱型）购自上海捷瑞生物工程有限公司。

引物合成来自华大基因。

2。2试验方法

2。2。1主要试剂以及培养基的配制

1、PDA培养基(1L)：土豆洗干净后去皮，称取200g切成小块，加入500ml蒸馏水煮沸30分钟，八层纱布过滤，将滤液倒入锅中，加热加入15g琼脂搅拌至全部融化，然后加入葡萄糖20g，定容至1000ml，自然pH，分装在锥形瓶中。121℃灭菌20分钟（若为液体，则无需加入琼脂）。

2、木聚糖酶诱导培养基（1L）：PDA液体培养基中的葡萄糖换成木聚糖，其余均同。

3、LB培养基(1L)：胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g、调节pH值为7。0，121℃灭菌20分钟，可于室温下保存（若固体，则需加入15g/L的琼脂）。