蛾蝇抗菌肽Attacin-mf的基因克隆及其表达载体的构建(2)
目前，研究比较深入的用来描述抗菌肽的作用机制模型有毯式模型、桶板模型、环孔模型。另外，分子电穿孔模型和脂筏模型对解释抗菌肽的膜破坏机制也很重要［3］。这些模型基本表明，抗菌肽通过增加细菌细胞膜的通透性，使得大量细胞内容物外泄，最终导致细菌细胞的死亡。另外，一些实验结果表明，抗菌肽可能存在其它的抗菌机制，比如抗菌肽对某些酶活性的抑制、对细胞壁合成和核酸合成的抑制以及抑制蛋白质对核酸的结合等［4］。
引言图1：蛾蝇成虫图例
蛾蝇属于双翅目，毛蠓科，俗称蛾蝇或蛾蚋，体形较小，翅展很少超过8毫米，体表遍生鳞毛，翅宽而多毛，静止时收在体背呈屋脊状，形如小蛾。蛾蝇的幼虫生活在水生生物栖息地，包括浴缸、洗手盘等；成虫则大多出没于夜间和潮湿的环境中，是一种卫生间常见的滋扰性害虫。蛾蝇多数无害，但有的种类吸食人血，这些种类有时单列为白蛉科。毛蠓通常一次产卵30到100粒，48小时内即出孵；幼虫期为9到15天，蛹期20到40个小时，成虫寿命约为3周。
目前对蛾蝇生理生化及行为学研究很少。关于蛾蝇的抗菌肽方面研究没有相关报道。在前期工作中，我们对蛾蝇转录组进行分析时发现attacin抗菌肽序列。本课题中我们将构建出蛾蝇attacin抗菌肽的原核表达载体。该抗菌肽在大肠杆菌中的成功表达，可以为其抗菌、抗病毒、抗肿瘤作用等生理活性研究提供必要的工具试剂，为之后的研究提供坚实基础。在未来有望可以通过基因工程等技术对其进行改良改善，设计并生产出抗菌肽的新型药物，解决目前日益严重的抗生素耐药性问题，充分发挥其应用及经济价值。同时，我们还可以完善对蛾蝇生理生化信息的探索。
1 材料与方法
1.1 实验材料、试剂
实验材料：蛾蝇成虫（Psychodidae），采于南京农业大学校园中。
生化试剂：Trizol®Reagent(ambin)； Plasmid Miniprep Kit(Biomiga)；Gel/PCR Extraction Kit(Biomiga)；In-Fusion®SMARTerTM cDNA library Construction Kit(Clontech)； pMD19-T载体，大肠杆菌DH5α，大肠杆菌DE-3，其他试剂为分析纯试剂。
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