摘 要：本实验研究蛹虫草培养过程中多肽类物质的变化。以蚕蛹为材料，用人工对蚕蛹接种虫草菌并提供适宜生长环境的方法进行人工培养，于接种培养1d、2d、3d、5d、6d、7d、8d和9d取样，冷冻干燥后，剥去外层的壳，并将里面的物质碾成粉末，加入缓冲液，制得不同培养时间的蛹虫草样品溶液。用化学方法提取蛹虫草样品溶液中的多肽类物质，将提纯后的样品溶液进行电泳分析，在所配的胶为两层不连续胶且下层的胶为尿素胶，标准品的上样量为20μL以及样品的样品的上样量为10μL的情况下才能得出最佳谱图。采用Alamar blue法测定蛹虫草的多肽物质抑制肿瘤细胞的活性，实验结果表明培养时间越长，抑制肿瘤细胞活性越强，尤其是蛹虫草的抑制率最好。此研究为蛹虫草的培养及产品的开发积累相关数据。77639

毕业论文关键词：蛹虫草、人工培养、提取分离、电泳分析、抗肿瘤细胞活性

The change of the peptides in the culturing process of Cordyceps militaris

Abstract: The experimental studied on the change of polypeptide substances in the culturing process of cordyceps militaris。 We made silkworm pupae as materials, injected the cordyceps mycelium into silkworm pupae and provided suitable growth environment to it。 We delivered the cultured cordyceps militaris out in different times。 The sample solution of cordyceps militaris was obtained by serial extraction methods, including freeze drying ,cutting outer cocoon of cordyceps militaris, grinding method, and ammonium sulfate precipitation。 Then cordyceps militaris polypeptides was extracted by chemical method and analysed by electrophoresis method。 The clearest electrophoresis chromatogram was obtained when  the preparaed two-layer discontinuous glue and the lower layer were urea layer, the volume of standard proteins was 20 μL and the volume of sample  was 10 μL。 The antitumor activities of the polypeptide were determined using alamar blue method。 The results showed that the longer Cordyceps militaris was cultured the better antitumor activity was。 This study will accumulate data for the growth and development of cordyceps militaris。

Keywords：cordyceps militaris; artificial culture; extraction and separation; electrophoretic analysis; anti-tumor activity

目录

前言 1

1材料与方法 2

1。1供试材料 2

1。2实验试液 3

1。3实验仪器： 3

1。4方法 4

2 结果与分析 7

2。1蛋白质浓度 7

2。2蛋白多肽电泳 8

2。3。抑制肿瘤细胞活性 9

2。4抑菌活性 10

3讨论 10

致谢 11

参考文献 12

前言 

蛹虫草又名北虫草、蛹草菌、北冬虫夏草等，是具有巨大实用价值的一类资源，隶属于真菌门(Eumycota)、子囊菌门(Ascomycota)、子囊菌亚门(Ascomycotinia)、粪壳菌纲(Sordariomycetes)、肉座菌亚纲(Hypocreomycetidae)、肉座菌目(Hypocreales)、虫草科(Cordycipitaceae)、虫草属(Cordyceps)[1]。蛹虫草由子座（草部分）论文网与菌核（鳞翅目昆虫或蛹的尸体）两部分组成[2]，与冬虫夏草相似，世界性分布，在中国、日本、美国、德国、俄罗斯都存在，而我国主要产于吉林、云南、内蒙古、辽宁等省区[3]，天然资源数量很少。现代中医认为虫草针对肾肺有显著疗效，不仅能治疗肾虚还能补肺阴，是唯一能调节平衡阴阳的中药。虫草还富含人体所需的氨基酸和维生素 ，这一要素决定着虫草有增强免疫、抗氧化及抗肿瘤等功效[4-6]。冬虫夏草的药效显著，但对其生长环境要求十分苛刻，大多实验证明，虽然蛹虫草是冬虫夏草的近缘种且两者之间的保健功效和有效活性成分相似，但是蛹虫草对生长环境要求不高，不需要专一的寄主，能够作为冬虫夏草的替代品，且蛹虫草目前已经实现人工规模化生产。因此近年来蛹虫草成为食药用真菌研究开发的热点之一[7]。