中草药对水产动物生理生化指标的影响(2)
黄芪，又称棉芪，蜀脂。属草本植物，根部饱满，茎部向上，常为浅灰色，多有数枝干。它的营养成分有黄芪多糖、黄酮类物质、皂类物质、多种氨基酸和少量微量元素等，同时含有香豆素、亚油酸、胆碱、甜菜碱、苦素及文生素A、E、B1、B2 、叶酸等。黄芪的药用价值很高，至今已经拥有2000年左右的医用经验，主要有促进人类免疫机能发挥，利尿保肝，抗氧化，抗乏力，补气养颜及便秘等功效。它对免疫类疾病有很重要的功效，黄芪既能够影响体液免疫，细胞免疫，同时还能促进动物体的免疫机能的发挥，起到防范疾病的功效[2]。有研究显示部分植物多糖可以通过影响鱼类的免疫器官的发育情况，达到促进机体免疫系统工作效率的作用[3]。向枭等[4]研究显示，在适宜的剂量下, 齐口裂腹鱼的溶菌酶活性和超氧化物歧化酶活性都因为黄芪多糖的影响而显著提升了。宋文华[5]等在配制草鱼饲料时，将多种中草药按不同比例放入饲料，并通过试验结果里不同酶的活性来判断其对草鱼免疫机能的影响，其结果显示，在饲料中放入黄芪作为免疫添加剂能提高草鱼的LYSO活性、ALP活性、SOD等活性，提示黄芪能够通过影响不同的酶活性从而增强草鱼的免疫机能。白东清[6]等用黄芪长期饲喂一种鱼，并在不同时段测定鱼体内不同免疫类酶的活性。实验结果显示，在鱼类食物中放入一定浓度的中黄芪能够增强鱼类的免疫机能。
近年来对于黄芪作为一种中草药，以其高效的促免疫能力和良好的安全性，逐渐成为了专家和学者试验和推广的主要免疫添加剂。本试验通过记录不同剂量黄芪对水产动物白细胞数、血浆溶菌酶、免疫器官指数和SOD活性的具体数值来分析其对鱼类免疫作用的影响。为将传统中药黄芪作为一种新型免疫添加剂提供理论基础。
1 材料与方法
1.1主要试验药品及仪器
紫外可见分光光度计（UV-2600 岛津公司）、全自动生化分析仪 （Selectra-E 荷兰威图）、全波长酶标仪 （Multiskan Go Thermo）、高速冷冻离心机 （OPTIMA L-XP BACKMAN）、便携式高速匀浆机 （D160大龙）、超纯水制备装置 （美国Milli-Q系统)、黄芪颗粒（4g*9袋/包），批号：国药准字Z20113052，南京同仁堂生产。
试验所用其他实验用品如中性红、结晶紫、甲醛等均由南京拓伦生物科技有限公司生产，血浆溶菌酶、超氧化物歧化酶（SOD）等免疫抗氧化指标用试剂盒测定，购自南京建成生物工程研究所。
1.2 试验动物
异育银鲫(Carassius auratus gibelio)，采购于农贸市场，平均重约210-230 g，挑选健康无外伤，外形正常，规格一致的试验鱼饲养于PVC水族箱中（90*60*45cm），养殖水体为纯淡水，试养水的温度控制在22-24℃，试验过程中持续充气，定期换水。实验正式开展前，先驯化30d，期间饲喂商品饵料，不添加任何药物。
1.3试验方法
1.3.1药液配制
取一定量的黄芪颗粒与粉状饲料加蒸馏水混合，分别配制药物浓度为0.04g/g和0.08g/g的软饵料各50g。
1.3.2给药方法
试验分为对照组、低剂量组、高剂量组（每组3个重复），连续14天口灌给药，每天2次，低剂量组、高剂量组给药剂量分别为0.08 g/kg和0.12 g/kg，对照组则灌入不含黄芪颗粒的饲料。
1.3.3样品采集
试验开始后的第12、15、18、21 天采集血液样品，第一次采样于第12天口灌给药4h后进行。血液采集通过尾静脉，每尾鱼的血液样本分成两部分，一部分经肝素抗凝取全血，进行血细胞计数；另一部分经抗凝后离心，取血浆。检测血浆溶菌酶、SOD等生理指标（每个重复随机选取6尾鱼）。