Ca2+诱导的洋葱细胞凋亡研究(2)
目前有关植物细胞凋亡的研究时有报道，但鲜见对植物细胞凋亡发生过程的描述，对于钙离子溶液胁迫植物细胞凋亡，特别是胁迫植物根尖细胞凋亡的报道则更少。本实验设置了钙离子不同处理浓度与处理时间，通过观察不同处理浓度与处理时间组合作用下洋葱鳞茎内表皮细胞凋亡的形态学表现、统计细胞凋亡率、测定丙二醛含量，探索钙离子对细胞凋亡的诱导作用，并为探索植物细胞的凋亡机制提供新的途径与方法。
1.材料与方法
1.1实验材料
隔年洋葱，由周口师范学院生命科学与农学学院提供。
1.2试剂
CaCl2、改良苯酚品红染液、PBS缓冲液、10%的三氯乙酸、0.6%的硫代巴比妥酸等。
1.3实验方法
1.3.1洋葱的复苏培养
取隔年洋葱，剥去外皮，剪掉老根，室温下置于盛有清水的烧杯中培养2～3 d，每天换水，并每天观察洋葱的发根情况，当露出幼嫩的白根，表明洋葱已经复苏。
1.3.2 PBS缓冲液的配制
PBS缓冲液的配制：称量一定量的磷酸氢二钠，磷酸二氢钾，氯化钠，氯化钾，放入烧杯中，加适量蒸馏水，并用玻璃棒充分搅拌使其完全溶解，然后加入1mol/L的氢氧化钠，调pH值至7.4，最后定容至1000 mL，配制出0.2 mol/L的PBS缓冲液，保存备用。
1.3.3不同浓度Ca2+溶液的配制
分别称取一定量的氯化钙，放入4个烧杯中，分别往烧杯中加入备用的PBS缓冲液适量，并用玻璃棒充分搅拌使其完全溶解，最后定容至1000 mL，配制0.2mol/L、0.4 mol/L、0.6 mol/L、0.8 mol/L的氯化钙溶液。