软骨中硫酸软骨素的提纯与应用(2)
1.3.1软骨硫酸软骨素的多糖碱法提取工艺 2
1.3.2软骨硫酸软骨素的多糖酶法提取工艺 2
1.3.3软骨硫酸软骨素的测定方法、多糖组分分析 2
1.3.4硫酸软骨素粗品的纯化 2
1.3.5硫酸软骨素的应用 3
1.4 课题研究目的和意义 3
1.5 课题研究的内容 3
2 实验材料和方法 4
2.1 实验仪器及试剂 4
2.2 实验方法 4
2.2.1蛋白酶活力的测定 4
2.2.2硫酸软骨素最佳提取工艺条件的确定 7
2.2.3放大实验 8
2.2.4 Amberlite IRA-933 型阴离子交换树脂纯化硫酸软骨素粗品 9
2.2.5旋转蒸发浓缩 10
2.2.6真空冷冻干燥机 10
2.2.7酸软骨素乳膏剂的制作 10
2.3分析方法 12
2.3.1硫酸咔唑法 12
3 结果与分析 14
3.1木瓜蛋白酶最佳酶解工艺条件确定 14
3.2放大实验 15
3.3硫酸软骨素粗品的纯化 15
3.3.1洗脱曲线 15
3.3.2旋转蒸发浓缩 16
3.3.3硫酸软骨素乳膏剂的制作 16
4 结论 17
致谢 18
参考文献 19
1. 绪论
1.1 硫酸软骨素概述
硫酸软骨素是一类糖胺聚糖，共价衔接在蛋白质上构成蛋白聚糖。硫酸软骨素普遍分布在动物组织的细胞外基质和细胞的表面，糖链由交互的葡萄糖醛酸和N-乙酰半乳糖胺（又称N-乙酰氨基半乳糖）二糖单位形成[1]，通过一个似糖链接区衔接到核心蛋白的丝氨酸残基上。
硫酸软骨素存在于从线虫到人除植物外的全部生物中，有着许多非常重要的生理效力。尽管多糖的主链结构并不是很复杂，可是就硫酸化程度、硫酸基以及两种差异向异构糖醛酸再链内的分布来讲，显现高度的不均一性。硫酸软骨素的精细结构决策着功效的特异性和与多种蛋白质分子的相互作用。硫酸软骨素是一般与蛋白质结合在一起以蛋白多糖的形式存在。
硫酸软骨素是从动物骨头组织里提取出来以及制备出来的酸性粘多糖类物质，呈现白色或者类白色粉末的物理性状；气为无臭，略带咸；具有引湿性。他的水溶液有粘稠性，并且加热不凝结。在水里面容易溶解，但是不溶于乙醇、乙醚、和丙酮等多种有机溶剂中[2-3]，他的盐类化合物对热比较稳定，受热程度达到80℃也不会被破坏。硫酸软骨素的水溶液，在遇到较高的温度或者酸时立刻就不稳定，主要原因是其脱乙酰基或者降解成单糖或分子量较小的多糖[4-5]。
硫酸软骨素在酸性条件、碱性条件及酶解条件下形成的不饱和糖，包括低分子C的硫酸软骨素和硫酸软骨素的寡糖或双糖均与β-消除反应有关。多数硫酸软骨素含有酸基和羧基等集团，是一种聚阴离子的高分子化合物，具有还原性。在强酸和高温的条件下容易产生降解反应，他具有的硫酸基团可以和钡离子发生沉淀反应，沉淀物硫酸钡在硝酸或者盐酸中全不溶解。可以和苯肼发生反应生成糠脎[6] 。与浓硫酸反应生成糠醛或其衍生物，载与α-萘酚缩合生成紫色的缩合物[7]。CS与巴弗试剂的混合液在沸水浴反应，生成红色的沉淀物[8]。还可以在一定条件下与过碘酸发生氧化还原反应[9]。与间苯三酚发生缩聚反应，生成多环二芳基甲烷[10]。同対苯胺醋酸盐也可反应[11]。