蜡质芽孢杆菌AR156激发类似flg22介导植物免疫反应(3)
1.2.2 AR156诱导抗病性是否依赖于SA、JA、以及ET通路验证
选取生长了4周的拟南芥，实验组拟南芥品种为NahG（转基因植株，体内SA积累受到抑制）、sid2-2（SA信号通路受损）、npr1（SA, JA/ET通路下游的一个蛋白，调控一些防御相关基因的表达）、jar1（JA信号通路受损）、ein2和etr1（ET信号通路受损）；对照组为Col-0 WT（信号通路正常）。
选取实验组和对照组每株拟南芥上3片叶齢、长势一致的成年叶片做好标记。分3组处理，即用5.0×107 cfu•ml-1 AR156，1 μM flg22, 无菌水（对照）分别注射拟南芥叶片。24 h后在处理过的拟南芥叶片上注射浓度为5.0×105 cfu•ml-1的丁香假单孢菌番茄致病变种Pst DC3000；接种后用保鲜膜覆盖保湿12 h，揭去保鲜膜，置于22 ℃，光周期为光照10 h,黑暗14 h，相对湿度为40％-60%的温室继续培养，当植株叶片出现差异性发病表型时，对发病叶片进行取样拍照，并观察比较植株叶片发病表型差异。
接种病原菌Pst DC3000培养48 h后，对植株叶片取样进行致病性测定。取样前用75%的无水乙醇擦洗预取样的实验组和对照组的叶片两到三次后，取直径相同的打孔器截取叶片，每个截取的叶片样品分别放入一个EP管中，加10 mM Mgcl2研磨，之后吸取50 μL振荡液进行梯度稀释(吸取前将振荡液摇匀)，梯度稀释后将其涂布在K.B培养基中（为确保实验准确度每个处理设置10个平行处理）。在28 ℃培养箱中培养48 h。48 h后统计菌落数，统计分析数据。