摘要：纤维素降解菌通过分泌纤维素酶来降解利用纤维素，纤维素酶是降解纤维素的一组酶的总称，包括内切葡聚酶，外切葡聚酶和β-葡萄糖苷酶。其中的β-葡萄糖苷酶在纤维寡糖降解为葡萄糖的过程中起着至关重要的作用，且降解产生的葡萄糖会抑制其活性。本课题拟通过外源基因导入的方式来加强微生物的β-葡萄糖苷酶的活性。NF7-2为本组筛选出的一株纤维素降解真菌，本课题通过农杆菌介导的方式，将编码β-葡萄糖苷酶的cel3a基因成功转入NF7-2中，并对阳性转化子进行了分子鉴定。为进一步的酶活测定以及实际应用奠定基础。81949

毕业论文关键词：农杆菌，转化，β-葡萄糖苷酶

Abstract: Cellulose-decomposing microorganisms degrade cellulose by secreting cellulase。 Cellulase is the general terms of a group of enzymes that degrade cellulose and mainly composes of endoglucosyl, exoglucan and β-glucosidase。 β-glucosidase plays a very important role in the process of degrading Fiber oligosaccharides into glucose。 While the produced glucose inhibits its own activity。 This aims of this study is to enhance the activity of the micro- organisms’β-glucosidase by expression of exogenousβ-glucosidase gene。 NF7-2 is one of our isolated cellulose-decomposing microorganisms。 Here we successfully transformed β-glucosidase cel3a into NF7-2 by agrobacterium- mediated transformation。 The positive transformations were confirmed by PCR。 This study lay the foundation for further enzyme activity measurement and may produce practical application。   

Keywords：Agrobacterium, transformation,β-glucosidase

目录

引言 6

1 材料与试剂 8

1。1 丝状真菌NF 7-2 8

2 转化过程 9

2。1 NF7-2对潮霉素的敏感性 9

2。2 NF7-2孢子制备 9

2。3农杆菌的培养时间 9

2。4携带目标基因的农杆菌的培养 10

2。5 NF7-2孢子与农杆菌共培养 10

3 转化子的分子鉴定 10

参考文献 14

致 谢 17

引言 

纤维素是地球上最为丰富的有机质，在自然界中碳循环中占有重要的地位。但其有效利用率很低，所以纤维素资源的有效利用成为一直以来的研究热点。通过合理利用天然的纤维素，利用酶类去降解，分解成糖类，再通过一些方法继而将这些糖类转化成乙醇，蛋白，气体燃料等类似于发酵燃料的一些物质。如今，世界将面临很多问题，比如被严重污染的环境问题，越来越紧缺的粮食问题，紧张的饲料资源以及极近匮乏的不可再生资源等一系列生存的问题。因此，如何更有效地开发和利用纤维素资源已成为当今世界的热门课题之一。论文网

生物方式降解纤维素耗能低、污染小，该方式主要通过纤维素酶把长链的纤维素逐步降解为单糖。纤维素酶由内切型-β-葡聚糖酶(endo-β-glucanase，EG，EC 3。2。1。4)，纤维二糖水解酶(cellobiohydrolase，CBH，EC 3。2。1。91)和β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase，BG，EC3。2。1。21）这三种酶组成。β-1，4糖苷键在内切酶能作用下被裂解。外切酶在非还原端上，通过裂解β-1，4糖苷键，使得纤维素被催化成纤维二糖。最后，通过检测中，纤维和其他纤维的纤维，事实上在结晶纤维素分解酶对纤维素的，没有单独的晶体纤维素裂解，当三种酶共同存在、通过相互合作可以完成最后的水解过程，纤维素最终被降解为葡萄糖。