胡萝卜中油菜素内酯信号途径相关转录因子BZR1的克隆与表达分析(3)
本研究以胡萝卜品种黑田五寸(Heitianwucun)为试验材料，通过RT-PCR的方法克隆与分离其BZR1基因，还对BZR1转录因子的氨基酸序列及其各项理化性质进行了分析，并采用qRT-PCR的方法分析BZR1基因在胡萝卜五个生长发育阶段不同部位的表达。研究油菜素甾醇类化合物信号转导的重要组分BZR1在胡萝卜生长过程中的表达，对油菜素甾醇类化合物信号转导与作用机理研究有其重要理论意义，便于日后利用油菜素甾醇类化合物信号转导组分基因对胡萝卜进行作物改良或合理施用此类激素调节胡萝卜的生长。
1材料与方法
1.1植物材料、菌种及质粒
研究使用的胡萝卜品种黑田五寸(Heitianwucun)种植于南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室的人工气候室。人工气候室的昼夜条件为16h/8h，温度分别设定为25℃/18℃，300μmol m-2s-1的光照强度。本研究选取胡萝卜生长发育的五个时期：分别采集其播种后20d，40d，60d，75d，90d五个阶段的根、叶柄和叶片样品，样品液氮速冻并保存于-80 ℃冰箱用于RNA提取与分离及cDNA的合成，作为实时定量PCR的材料。
大肠杆菌菌株DH5α：由南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室保存；反转录酶 Mlu I 、Ex-Taq PCR聚合酶、质粒载体pMD19-T vector以及DL2000 Marker等：购于大连TaKaRa；Axy Prep DNA 凝胶回收试剂盒：购于杭州爱思进公司。