耐有机相氧化亚铁硫杆菌的驯化及培养特性研究(5)
图3.4 1.5%有机相的驯化结果
如上图3.4所示：有图3.4可知，以二价铁氧化率1%为准，在第二遍和第三遍驯化时，迟缓期均为18~20小时，所以T.F菌在经过两遍驯化后耐1.5%有机相的能力已经稳定；对于菌体的生长来说，随着驯化遍数的增加，T.F菌的耐受性已经明显增强，驯化效果显著；第三遍的驯化曲线趋势已经和空白组的生长曲线靠近，可进行下一步转接驯化。
3.1.3 5%浓度有机相对 T.F菌的驯化研究
图3.5 5%三遍驯化过程中的细胞数变化
如上图3.5所示：由1.5%转接，如时间-细胞数曲线显示，在达到稳定期时细菌数由第一遍到第三遍的数值分别为9.2×107、1.1×108、1.2×108，可知在细胞数上已经可以与空白组中长势相同；值得注意的是，图中曲线显示，5%有机相下T.F菌达到稳定期由原来的60h变成了72h,可见5%浓度有机相对抑制T.F菌的生长有显著的影响；但是图中的曲线图比起1.5%驯化得到的曲线图相比，显得很凌乱，没有稳定的驯化趋势，我想原因有二：1、是因为模拟萃取的过程是人为的，可能会导致培养基中的有机相含量是不同的；2、实验过程中的培养基搁置时间及培养条件可能有变化；3、是因为5%属于偏高浓度，对T.F菌的影响是显著的。
图3.6 5%有机相的驯化结果
如上图3.6所示：由1.5%转接，以二价铁氧化率1%为准，在第一遍到第三遍驯化时，迟缓期分别为40小时、32小时和24小时，所以T.F菌在经过两遍驯化后耐5%有机相的能力已经较稳定且靠近空白组T.F菌的生长情况。由氧化率-时间的折线图可知，第一遍驯化用时为96小时，经过三遍驯化后还不能完全达到空白组的效果，所以虽然对于菌体的生长来说，随着驯化遍数的增加，T.F菌的耐受性已经明显增强，驯化效果较显著。此时建议不易继续驯化更高浓度的有机相。
3.1.4 不同有机相浓度转接时的情况研究
图3.7 T.F菌在各梯度驯化结束时的生长曲线
如上图4所示：空白组，1.5%和5%的氧化率-时间折线图基本完全重叠，所以对于1.5%有机相和5%有机相的驯化效果已经达到预期目标。由1.5%转接至5%时为完全驯化的稳定耐1.5%有机相的T.F菌。
3.2 驯化后菌株的生长特性研究
3.2.1 初始pH对细菌氧化Fe2+的影响
溶液的初始pH值对细菌氧化Fe2+的影响如图3.8所示。细菌氧化Fe2+过程中经历了迟缓期、对数期、稳定期、衰亡期四个阶段。在迟缓期细胞不分裂，细菌数量基本文持恒定或增加很少，此时胞内RNA、蛋白质等物质含量有所增加，细胞体积增大，亚铁转化速率较低。经历了迟缓期的适应之后细菌进入对数期，在对数期，细菌以最大的速率生长和分裂，细菌数量呈对数增加，细菌活力强，亚铁离子的转化速率也最快。随着亚铁离子的消耗，供细菌生长的营养物不足，细菌的生长速率降低，细菌开始大量死亡，此时生长速率等于死亡速率，进入稳定生长期，细菌活菌数最高并文持恒定，此时亚铁的转化率也大为降低。最后由于营养物的耗尽、代谢产物的积累，细菌进入衰亡期，细菌大量死亡，亚铁转化速率为零。若Fe2+氧化率从0到5％变化所需的时间为迟缓期。当pH为2.0和2.5时，其迟缓期分别为10h和12h，当pH为1.0时，环境抑制了细菌的正常生长，因而基本上没有氧化，但在pH为2．5时产生大量的沉淀，因此最适宜的pH值在2.0左右。
图3.8 pH值对氧化亚硫铁杆菌氧化Fe2+的影响
3.2.2 温度对细菌氧化Fe2+的影响
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