盐胁迫下油菜幼苗对外源抗坏血酸的生理响应(2)
油菜属于十字花科芸苔属植物，是重要的食用油料作物，在中国其产量和种植面积均居世界首位[5]。盐渍胁迫严重影响油菜的产量和质量，所以研究如何缓解油菜盐胁迫是非常有必要的，并且对保障油菜种植业的稳定健康发展也有重要意义。
植物体内存在着一种抗氧化剂即抗坏血酸(Ascorbic Acid，AsA)，可以减少植物代谢过程中产生的氧自由基，减轻膜脂过氧化作用对细胞造成的伤害[6]。近几年，很多研究者致力于研究AsA是如何减少自由基对生物体的伤害。在AsA的抗性研究中，周琴等[7]的研究说明，外源AsA在一定浓度范围内可提高酸雨胁迫下的油菜幼苗的叶绿素含量、生物量及POD活性；常云霞[8]等的试验研究表明，外源AsA极显著提高了盐胁迫下小麦幼苗的芽长、根长以及根系活力，降低了膜脂过氧化产物MDA含量；此外，还有一些研究也发现，适宜浓度的AsA能增强种子萌发能力和幼苗的抗性，能减轻盐胁迫对黄芩种子萌发及幼苗生长发育的抑制[9]。而AsA对油菜抗盐渍胁迫方面的研究很少，通过本试验研究不同浓度AsA处理对盐胁迫下油菜幼苗的生长和代谢情况及POD等保护酶系统的影响，以期揭示抗坏血酸缓解盐胁迫对油菜幼苗的伤害机制，并为进一步建立新的抗盐渍调控方法提供了理论基础。
1.材料与方法
1.1 实验材料
本实验所用的油菜品种为“周油589”油菜，该品种在2014年通过了河南省农作物品种审定，油菜种子由周口师范学院提供。
1.2 培养方法
实验于周口师范学院植物生理学实验室完成。挑选子粒均匀的油菜种子，用0.1%的HgCl2溶液消毒10min，自来水洗干净，在蒸馏水中浸泡24h。将已经浸过种的油菜种子随机分成7组，每组200粒，均匀放在铺有一层纱布的方形托盘中，每盘200粒，加入适量蒸馏水，于室温下培养，2天换一次蒸馏水并且每天用喷壶喷洒一次。待油菜幼苗长到株高6-7cm时定苗，每盘留150株幼苗，用一定浓度的NaCl（100mmol•L-1）溶液对其进行盐胁迫，分别用不同浓度的（0、1、1.5、2、2.5、3g•L-1）AsA溶液进行叶面喷施处理，每天中午喷施1次，连续喷施7天，同时以蒸馏水培养的油菜幼苗作空白对照（CK），连续培养7天后，测定每组油菜幼苗的株高、鲜重等生物量，采取叶片和根尖，进行形态指标、根系活力、叶绿素含量、POD活力、MDA含量和活性氧自由基产生速率的测定。
1.3 实验方法
盐胁迫处理7天后，取油菜幼苗进行各项生理指标的测定。用测量法测定株高与鲜重；油菜叶片叶绿素含量测定参照刘萍的乙醇与丙酮浸提法[10]；MDA含量参照张志军等的方法测定[11]；根系活力测定参照李明军等的氯化三苯基四氮唑（TTC）法[10]；过氧化物酶（POD）含量测定采用愈创木酚比色法测定[10]；超氧阴离子产生速率参照王爱国等的方法[12]，每个生理指标测定须连续重复三次。
1.4 数据分析
所有数据均取3次重复平均值，采用Microsoft Excel 2010作图对数据进行分析。