Rho1参与热胁迫调控灵芝三萜生物合成的初步研究 (3)
RNA的提取：(1)RNAiso Plus裂解样品：将菌丝在液氮预冷的研钵中研磨，之后移入加有800 µL RNAiso Plus的离心管中，剧烈颠倒混匀；(2)室温静置5 min，4℃，12000 rpm，离心5 min；(3)上清转移，加入1/5体积氯仿，剧烈震荡，室温放置10 min，4℃，12000 rpm，离心15 min；(4)转移上层至新离心管，加入等体积异丙醇，混匀，室温放置5 min；4℃，12000 rpm，离心10 min，弃上清。(5)加入500 µL 75%乙醇，混匀，4℃，离心5 min，弃上清；(6)冰盒干燥3 min，干燥RNA沉淀，加30 µL无RNase的水溶解，电泳检测RNA。
cDNA的制备：(1)在新的1.5 mL的离心管中加入RNA溶液17 μL，然后加入Oligo(dT) 3 μL；(2)70℃保温10 min后，冰浴10 min；离心5秒；(3)之后进行反转录。(4)42℃保温45 min；(5)95℃变性5 min，冷却，得到cDNA。
1．2．4基因表达量的测定
为了测定基因表达，将菌丝体在CYM平板上培养，然后如前所述用一层无菌玻璃纸覆盖，之后收集菌丝体并在液氮中冷冻。提取总RNA，使用持家基因18S rRNA进行基因表达的相对定量。