复合菌肥缓解污灌对玉米土壤酶的影响(3)
1.2 试验设置与处理
采用室内盆栽培养玉米，供试土壤风干、粉碎，装入花盆中，每盆装风干土11 kg,每盆播种10粒，种植35盆，将35盆玉米分为5个处理，植株出苗后分别采用浓度为25%、50%、75%的污水浇灌，根据天气状况和玉米的需水规律进行灌溉，全清水和全污水作为对照。污水灌溉10天后，测定土壤酶活性，每个配比设7个重复进行测定。然后，用106cfu/mL、108cfu/mL的复合菌稀释液分别浇灌污灌（25%、50%、75%、100%、清水）玉米。10天后，再次测定土壤酶活性，每个复合菌液浓度重复三次进行测定。分别于污灌10天后，和使用复合菌稀释液10天后的早上9:00取样，每小区采用5点取样法，各点取0-15cm表层土壤约10g，混合均匀后进行土壤酶活性测定[2]。
1.3 仪器和设备
SPY-250B-G型光照培养箱 上海博讯实业有限公司医疗设备厂
GZX-9240 MBE电热恒温鼓风干燥箱 上海博讯实业有限公司医疗设厂
HZQ-F250A恒温培养箱 上海悦丰仪器仪表有限公司
HH-S型水浴锅 巩义市英峪予华仪器厂
Spectrumlab22PC分光光度计 上海棱光技术有限公司
SW-CJ-2FD洁净工作台 上海博讯实业有限公司医疗设备厂
AL204电子天平 梅特勒—托利多仪器（上海）有限公司
LDZX-40KBS型立式电热压力蒸汽灭菌锅 上海申安医疗器械厂
海尔BCD-602WM冰箱 广东省顺德市荣贵区荣贵路
TG16台式高速离心机 湖南仪器仪表总厂离心机厂
DL-1万用电炉 北京中兴伟业仪器有限公司
1.4 土壤酶活性测定
土壤蔗糖酶测定采用3,5-二硝基水杨酸比色法，土壤淀粉酶测定采用3,5-二硝基水杨酸比色法，土壤脲酶测定采用靛酚比色法，土壤蛋白酶测定采用茚三酮比色法，过氧化氢酶测定采用高锰酸钾滴定法[8-11]。
1.4.1 土壤蔗糖酶活性的测定
1.4.1.1 试剂
（1）3,5-二硝基水杨酸溶液 （2）pH5.5磷酸缓冲溶液
（3）8%蔗糖溶液 （4）甲苯
（5）标准葡萄糖溶液
1.4.1.2 操作步骤
称5g风干土，置于50mL的三角瓶中，注入15mL 8%蔗糖溶液，5mLpH5.5磷酸缓冲溶液和5滴甲苯。摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。到时取出，迅速过滤。从中吸取滤液1mL，注入50mL容量瓶中，加3mL3,5-二硝基水杨酸溶液，并在沸腾的水浴锅中加热5min，随即将容量瓶移至自来水流下冷却3min。
溶液因生成3-氨基-5-二硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50mL,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。
为了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖引起的误差，每一土样需做无基质对照，整个实验需做无土对照。
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