油菜细胞质PCR鉴定方法初步研究(2)
油菜遗传育种和杂交种生产中，需要鉴定细胞质的类型。基于基因组序列研究表明，叶绿体基因组差别不大，而线粒体基因组差别较大，因此主要可以通过线粒体基因组的特异序列鉴定细胞质类型。
总结起来，细胞质类型的鉴定方法主要包括：
（1）线粒体基因组测序：主要包括传统的DNA测序方法，如Sanger提出的双脱氧测定法、逐步克隆测定法和基因组鸟枪法等；新一代DNA测序方法，如循环芯片测序法、Solexa测序法和焦磷酸测序法等 [12]，但上述线粒体基因组测序的方法过程复杂，成本过高，不易掌握；
（2）恢-保关系鉴定方法：取各种来源不同的植株作为测交父本，同时取其上花粉对待测的植株进行测交，至第二年收获测交一代并将其播种，在测交一代的各个生长阶段进行观察，于开花期调查其育性，将所观察的育性情况进行记录，与育性分级标准比对后确定测交一代育性，从而确定细胞质类型[13]。本方法可以准确有效鉴定细胞质类型，但是鉴定恢-保关系耗时过长，且成本过高，不易采用 ；
（3）标记鉴定方法：通过以线粒体基因上的特异序列，设计引物，通过PCR方法，理论上可以鉴别细胞质类型。
本研究尝试采用PCR鉴定方法，鉴定细胞质。通过提取油菜DNA，依据不同细胞质mtDNA的特异序列，设计引物，采用PCR方法扩增DNA片段，从而鉴定细胞质类型，研究通过PCR方法鉴定细胞质类型的方法。
1 材料与方法
1．1 实验材料
本实验的材料取自南京油菜遗传育种实验室,名称见表1。
本实验所用的仪器包括光照培养箱、低温冷冻离心机Eppendorf、恒温水浴锅、-20℃冰箱来自南京农业大学油菜遗传育种实验室;容量离心机、高速离心机、超速离心机来自南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室。
本实验所用的试剂有DNase I购自于Roche;蛋白酶K和RNase A购于sigma公司；其它试剂购自于生兴有限公司。