番茄WRKY22与WRKY25基因沉默载体的构建(3)
2.2.2 cDNA的合成
（1）取0.5 mL EP管，加入1-5 μg总RNA，补充DEPC H2O至11 μL。在管中加1 μL10μM Oligo（dT）18 ，混匀后离心。
（2）将离心管放于70 ℃水浴10 min，冰上放置1 min。
（3）依次加入以下试剂：25 mM MgCl2 2 μL，10×PCR buffer 2 μL，0.1 M DTT 2 μL，10 mM dNTP mix 1 μL，摇匀后离心。
（4） 将上步EP管42 ℃水浴2-5 min。加入1 μL SuperscriptⅡ，42 ℃放置50 min。
将离心管置于70 ℃恒温15 min以终止反应。
（5）将1 μLRNase H加入置于冰上的EP管中，37 ℃水浴20 min。将cDNA保存于-20 ℃备用。
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