摘  要目的：从紫云英根部组织分离根瘤菌并进行鉴定；方法：通过微生物分离技术平板稀释涂布法分离纯化根瘤菌，使用菌落PCR方法扩增单克隆菌落16s rDNA并测序，最终通过Blastn服务器进行比对，以确定分离的菌种是否为根瘤菌。结果：被鉴定菌种的16s rDNA测序结果与已知FK14根瘤菌16s rDNA序列比对结果显示同源性为100%。结论：分离到的菌种可能是根瘤菌FK14。88396

毕业论文关键词：紫云英； 根瘤菌； 分离； 鉴定；16s rDNA

Abstract Objective: To isolate and identify the rhizobium。Methods:Microorganism separation method of plate dilution was performed to purify the rhizobium and bacteria colony PCR was used to amplify the 16s rDNA sequence,which sequenced further。 Finally, the Blastn server was used to determine whether the isolated strains were Rhizobium and the phylogenetic tree was analyzed by MEGA4。Results:The homology of 16S rDNA sequences of the identified strains and the known FK14 Rhizobium was 100%。 Conclusion: The isolated bacteria could be Rhizobium FK14。

Keywords: Astragalus;  Rhizobium;Isolation;  Identification;  16s rDNA

目 录

引言 4

1材料与方法 5

1。1试验材料 5

1。2紫云英根瘤菌源Y于Y优E尔Y论L文W网wwW.yOueRw.com 原文+QQ752018.766 的初步分离 5

1。2。1实验材料 5

1。2。2实验所用培养基 5

1。2。3 实验步骤 5

1。2。4将保存的单克隆进行常规形态鉴定[7] 5

1。3紫云英根瘤菌的分子生物学鉴定 6

1。3。1目的根瘤菌DNA的提取 6

1。3。2 根瘤菌DNA的扩增 6

1。3。3核酸电泳 7

1。3。4胶回收 7

1。3。5 测序及鉴定 7

2结果及分析 8

2。1通过平板稀释法进行根瘤菌的初筛结果及分析 8

2。2 PCR扩增结果及分析 8

2。3产物纯化结果及分析 8

2。4 16s rDNA序列比对及鉴定及鉴定结果分析 9

3结论及讨论 12

参考文献 13

致谢 14

引 言 

紫云英为重要的绿肥作物和牲畜饲料，From优Y尔E论W文W网wWw.YouERw.com 加QQ75201,8766 嫩梢亦供蔬食。该种根、全草和种子可入药，有祛风明目，健脾益气，解毒止痛之效。根瘤菌作为一种革兰氏阴性短杆菌，菌体感染豆科植物根后会与都可植物共生形成根瘤。豆科植物与根瘤菌共生具有固氮能力强、固氮量大、抗逆性强的有点，是生物固氮中最高效的体系，固氮量约占生物固氮量的65%，因此固氮根瘤菌的选育已成为作物增产增效的关键[2]在农业上的应用价值有还田促进作物生长，增加产量，提高土壤速效养分含量，改良土壤，培肥地力[1-2]。针对目前紫云英种植面积不断下降的现状,提出了利用新的育种手段及优良品种扩繁相结合的办法,解决目前紫云英品种陈旧、退化、混杂的问题,大力加强紫云英的示范推广,充分发挥紫云英绿肥在农业可持续发展中的作用。旨在确保紫云英稳步快速发展，并推动高产、优质、高效、生态、安全的现代农业发展，根瘤菌能增加紫云英的固氮能力，从而能利用较少的耕种面积得到所需的紫云英产量。紫云英根瘤菌研究的发展趋势：目前在国内的研究已经掀起热潮，各种紫云英的应用也越来越广泛。从生物研究角度出发，紫云英的研究已经逐步从微生物层面上升到分子生物研究层面[3][11-12]。此次试验的意义，紫云英的根瘤菌株型繁多[4]，而且不同地域的紫云英根瘤菌固氮能力，已经生物遗传性也会有差异，如为深入推广紫云英绿肥,本研究从福建某地采集紫云英 进行生物学鉴定实验研究论文网