小叶女贞总黄酮和皂苷微波同步提取工艺及抗氧化活性(2)
2.1.4 微波功率的选择 7
2.2 正交试验结果 7
2.3 抗氧化试验结果 9
2.3.1 小叶女贞不同部位提取液对（O2-•）的清除活性 9
2.3.2 小叶女贞不同部位提取液对（•OH）的清除活性 10
3 结论 12
参考文献 12
致谢 14
小叶女贞总黄酮和皂苷微波同步提取工艺及抗氧化活性引言
小叶女贞是木犀科女贞属小灌木，其化学成分目前所了解的主要有黄酮类、皂苷类、多糖类等，近年来发现小叶女贞加入药中，具有清热解毒，治烫伤、外伤等功效，现代药理研究表明小叶女贞还具有抗氧化[1]、抗肿瘤[2]、抗衰老[3]等功效。微波是高频电磁波穿透萃取物质，到达被萃取物料内部，微波能迅速转化为热能使细胞内部温度快速上升，当细胞内部压力超过细胞壁承受能力，细胞破裂，提取细胞内有效成分的技术[4-5]。微波因具有选择性高、节能高效、加热均匀、快速等的特点，因此用微波提取中药活性成分引起了研究者的关注。
本实验以小叶女贞果实作为主要材料，利用微波辅助法，通过单因素试验分析微波提取功率、乙醇浓度、料液比、微波处理时间对小叶女贞中总黄酮和皂苷提取率的影响，并通过正交试验优化筛选出小叶女贞总黄酮和皂苷的最佳提取条件。同时采用邻苯三酚自氧化法[6-9]和Fenton法[10-12]测定小叶女贞不同部位的提取液对超氧阴离子自由基和羟自由基的清除率，研究小叶女贞的体外抗氧化活性。本实验旨在筛选小叶女贞总黄酮和皂苷的最佳提取条件，为小叶女贞总黄酮和皂苷的提取开发利用提供理论依据。
1 实验部分
1.1 实验所需材料、试剂及仪器
材料：小叶女贞果实、叶片、花。
试剂及药品：硝酸铝、无水乙醇、硫酸亚铁磷酸二氢钠、亚硝酸钠、氢氧化钠、磷酸氢二钠、香草醛、冰醋酸、高氯酸、三羟甲基氨基甲烷、浓盐酸、邻苯三酚、邻二氮菲、双氧水。
仪器与设备： AR124CN电子天平（奥豪斯仪器有限公司）；HH-S4电热恒温水浴锅（巩义市予华仪器有限责任公司）；玻璃仪器气流烘干器（巩义市予华仪器有限责任公司）；WD800微波炉（格兰仕微波炉电器有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）循环水真空抽气泵（郑州市亚荣仪器有限公司）；DHG-2150B电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；V-5000可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）等。
1.2 提取工艺流程
小叶女贞→干燥→粉碎→称取女贞子粉2 g→乙醇浸泡2 h→微波提取两次→抽滤→合并提取液→乙醇定容至一定体积→样品液备用。
1.3 总黄酮的含量测定
1.3.1 总黄酮标准曲线的绘制
根据所查阅的资料可得到以芦丁标准溶液为样品的标准曲线，其回归方程为：y =13.257x -3.1×10-3，R2 = 0.9998。
1.3.2 总黄酮提取率的测定
取稀释的样品溶液1 mL至试管中，各支试管加入30%乙醇使成5 mL，再每支试管加入0.3 mL5%亚硝酸钠溶液，混匀，放置6 min，后每支试管加0.3 mL10% Al(NO3)3溶液，混匀，放置6 min，然后每支试管加4 mL4% NaOH溶液，最后每支试管用蒸馏水定容到10 mL，室温静置15-20 min，在波长510 nm处测定吸光度。根据标准曲线算出测量液中总黄酮的浓度C（mg/mL），按照下面的公式计算黄酮的含量（%）。
提取率（%）＝CVN/10W
其中：W－原料干重（g）；C－测量液总黄酮浓度（mg/mL）；N－稀释倍数；V－粗提液体积（mL）。
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